黴菌分類鑒定培養基
黴菌培養時常因不同的培養基而在生理和形態方麵表現出極大的差異,故描述菌種時應注明鑒定培養基。最為常用的是察氏瓊脂(Czapek Agar)和馬鈴薯葡萄糖瓊脂(PDA),通常青黴、曲黴用察氏瓊脂培養,其他黴菌則應選用PDA。
青黴和曲黴在察氏瓊脂上顏色和形態分化較好。通用的察氏培養基有三種:原配方、Dox修改和Thom修改配方。三者的差別在於硝酸鈉添加量分別是3.0 g、3.5 g和2.0 g。盡管Dox氏和Thom氏均稱自己修改後的配方青黴、曲黴生長良好,重複性高,但國家標準仍以原配方為鑒定培養基。我們認為Dox氏配方可以試用。
對於鐮刀菌屬的菌種,必要時要選用六種以上的不同培養基來分別顯示它的不同培養特征。對有特殊要求的黴菌,培養時也應滿足其條件,低水活度食品如果醬、糧食中的嗜幹黴菌,應使用大量添加蔗糖或食鹽的高滲培養基。如高鹽察氏瓊脂。
待鑒定菌株的分離和純化常用方法有直接點種法、劃線法、稀釋平板法。稀釋平板
法同常規檢驗,除了培養基用具選擇性的外,還要求每皿中長出的黴菌菌落在十個左右,太多則影響分離效果。另外,如采用傾注法,長在瓊脂深處的黴菌發育不良,無法觀察
其菌落特征。可改用表麵塗布法。此方法手續繁瑣,但所得種類較多。直接點種法將食物小顆粒直接種於分離培養基上,25℃培養2 d~3 d後,用接種針挑取孢子或菌絲,轉接於適當的瓊脂斜麵上待鑒定。此方法分純效果略遜。劃線法是用無菌水洗滌樣品,
用接種環沾取液體在分離培養基上劃線分離。此法最簡便,但可能遺落部分菌株。
黴菌分類鑒定時間
直接采用黴菌和酵母計數後的平板進行黴菌分類鑒定是可行的。但僅僅培養5 d~7 d時,菌種的形態特征不明顯,不容易觀察。通常於培養7 d~14 d時鑒定。
黴菌分類鑒定染色液
製片時染色液是必需的。常用兩種:乳酸品紅染色液(百萬分之一酸性品紅的乳酸溶液),染色速度快,尤其是幼齡組織上色快。胞壁組織清晰,適於顯微攝影。
乳酸苯酚棉藍染色液(10 g石炭酸溶於10 mL熱蒸餾水,再加入甘油20 mL、乳酸10 mL,最後,加棉藍cotton blue 0.22 g即成),折光率好,背景微藍,細胞不變形,殺菌防腐防腐,且不易幹燥,保持時間較長。1896年Amann氏發明。
乳酸苯酚棉藍染色液使用效果圖
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