一、實驗目的和內容
目的：學會測微尺的使用和計算方法及對球菌和杆菌的測量。
內容：1. 認識測微尺，學習目鏡測微尺的標定。
2．測定金黃色葡萄球菌和大腸杆菌菌體的大小。
二、實驗材料和用具
金黃色葡萄球菌、大腸杆菌的玻片標本。
香柏油、二甲苯；
顯微鏡、目鏡測微尺、鏡台測微尺、擦鏡紙。
三、操作步驟
l．測微尺的構造 顯微鏡測微尺是由目鏡測微尺和鏡台接物測微尺組成，目鏡測微尺是一塊圓形玻璃片，其中有精確的等分刻度，在5mm刻尺上分50份(圖14一lC)。目鏡測微尺每格實際代表的長度隨使用接目鏡和接物鏡的放大倍數而改變，因此在使用前必須用鏡台測微尺進行標定。
鏡台測微尺為一專用中央有精確等分線的載玻片(圖14—1A)，一般將長為1mm的直線等分成100個小格，每格長0.0lmm即10μm，是專用於校正目鏡測微尺每格長度的。
2．目鏡測微尺的標定 把目鏡的上透鏡旋開，將目鏡測微尺輕輕放在目鏡的隔板上，使有刻度的一麵朝下。將鏡台測微尺放在顯微鏡的載物台上，使有刻度的一麵朝上。先用低倍鏡觀察，調焦距，待看清鏡台測微尺的刻度後，轉動目鏡，使目鏡測微尺的刻度與鏡台測微尺的刻度相平行，並使兩尺左邊的一條線重合，向右尋找另外一條兩尺相重合的直線(圖15—lB)。
3．計算方法
標定公式：
目鏡測微尺每格長度（μm）=兩條重合線間鏡台測微尺的格數×10
÷兩條重合線間目鏡測微尺的格數
例如，目鏡測微尺20個小格等於鏡台測微尺3小格，已知鏡台測微尺每格為10μm，則3小格的長度為3×10=30μm，那麽相應地在目鏡測微尺上每小格長度為3×10÷20=1.5μm。用以上計算方法分別校正低倍鏡、高倍鏡及油鏡下目鏡測微尺每格實際長度。
4．菌體大小的測定 將鏡台測微尺取下，分別換上大腸杆菌及金黃色葡萄球菌玻片標本，先在低倍鏡和高倍鏡下找到目的物，然後在油鏡下用目鏡測微尺測量菌體的大小。先量出菌體的長和寬占目鏡測微尺的格數，再以目鏡測微尺每格的長度計算出菌體的長和寬。並詳細記錄於表15—1中。
例如，目鏡測微尺在這架顯微鏡下，每格相當於1.5μm，測量的結果，若菌體的平均長度相當於目鏡測微尺的2格，則菌體長應為3×1.5μm=3.0μm。
一般測量菌體的大小，應測定10～20個菌體，求出平均值，才能代表該菌的大小。
四、注意事項
1．鏡台測微尺的玻片很薄，在標定油鏡頭時，要格外注意，以免壓碎鏡台測微尺或損壞鏡頭。
2．標定目鏡測微尺時要注意準確對正目鏡測微尺與鏡台測微尺的重合線。
五、演示
1．目鏡測微尺、鏡台測微尺的顯微鏡下示教。
2．標定及測量方法示範。
六、實驗報告
1．目鏡測微尺標定結果：
低倍鏡下 倍目鏡測微尺每格長度是 μm。
高倍鏡下 倍目鏡測微尺每格長度是 μm。
油鏡下 倍目鏡測微尺每格長度是 μm。
2．菌體大小測定結果：
菌號 大腸杆菌測定結果 金黃色葡萄球菌的直徑大小測定結果
目鏡測微尺格數 實際長度 目鏡測微尺格數 實際直徑/µm
寬 長 寬 長
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
均值
試與己知的大腸杆菌和金黃色葡萄球菌的大小作一比較是否一致？為何？
七、問題和思考
1．為什麽更換不同放大倍數的目鏡和物鏡時必須重新用鏡台測微尺對目鏡微尺進行標定？
2．若目鏡不變，目鏡測微尺也不變，隻改變物鏡，那麽目鏡測微尺每格所測量的鏡台上的菌體細胞的實際長度（或寬度）是否相同？為什麽？
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