1.血平板溶血試驗
培養基:營養瓊脂,含有0.85%的氯化鈉和5%(體積分數)的去纖維蛋白血或經草酸鹽處理過的血。馬血對鏈球菌很合適,但其他的微生物(例如葡萄球菌)則用其他的動物血〈例如羊、兔子、牛)要更好一些。營養瓊脂培養基熔化後,冷卻到50℃,無菌地加入已滅菌的血細胞溶液(每10ml瓊脂加0.5ml)。用手旋轉或翻轉試管使其混合,倒入培養皿中。另外,也可以在培養皿中先加入〔5—10ml〕營養瓊脂,凝固後在營養瓊脂上再倒人5ml血瓊脂,形成薄層,凝固。
試驗方法:對於葡萄球菌,在平板上劃線接種,以得到單個菌落;如果是鏈球菌,可以傾倒平板接種,也可以劃線接種。在最佳生長溫度培養2d。
結果記錄:如菌落周圍有清晰的環帶出現,則表明有溶血現象。鏈球菌的β-溶血素作用能產生邊緣清晰的環帶;α-溶血素作用產生的環帶呈灰綠色且邊緣很模糊。但要注意,α-溶血素和β-溶血素的特征對於鏈球菌和葡萄球菌完全不同。對於葡萄球菌,則α-溶血素能產生清晰的環帶,而β-溶血素則產生暗色的模糊環帶。但是,葡萄球菌中的α-溶血素有時卻被認為是β-溶血素。因此,為避免混淆,最好是對溶血素的類型加以描述,而不僅是統稱為溶血素。
2.加強溶血試驗(CAMP)
加強溶血試驗是用於檢測B族鏈球菌中的一些菌株和某些特定菌株產生的細胞外可擴散的多肽(CAMP因子)。多肽與葡萄球菌中的β-溶血素可協同作用,使羊血瓊脂中兩種菌劃線培養的結合處產生加強的溶血作用。甚至非溶血的B族鏈球菌的CAMP測試也呈陽性。後來該方法被用來區分李斯特菌的不同菌種。
培養基:羊血(體積分數為5%)瓊脂。在檢測李斯特菌屬時,由於羊血中常攜帶有李斯特菌屬的抗血清,必須先用鹽水衝冼羊血的紅血球,然後再重新懸浮於滅菌的鹽水中。
試驗方法
(1)鏈球菌檢測將產生β-溶血的金黃色葡萄球菌培養液橫穿羊血瓊脂培養基平板劃一條直線。在直線的一端用待測培養液垂直劃線,該線與金黃色葡萄球菌培養液的劃線相距1-2mm,37℃培養18-24h。
(2)李斯特菌的檢測 將產生β-溶血素的金黃色葡萄球菌培養液橫穿衝洗過的羊血瓊脂培養基平板劃一條直線。用馬紅球菌培養液劃另一條平行線,兩線相距4cm左右:用待測菌液垂直於金黃色葡萄球菌和馬紅球菌劃線,與金黃色葡萄球菌球菌培養液和馬紅球菌培養液的線縣局1-2mm,18-24h。
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