1.學習並掌握細菌生長曲線的特點及其測定的原理,從而了解微生物在一定條件下生長、
繁殖的規律。
2.學習並掌握由生長曲線計算微生物代時的方法。
原理
生長曲線就是將一定量的單細胞微生物接種在適合的新鮮液體培養基中,在適宜溫度條件下進行培養,然後以菌數的對數為縱坐標,以生長時間為橫坐標,得到的曲線即是,如圖20-1 所示。生長曲線一般分為延遲期、對數期、穩定期和衰亡期四個時期。不同的微生物具有不同的生長曲線,同一微生物在不同條件下培養也會得到不同的生長曲線。生長曲線的測定包括血球計數法、平板菌落計數法、稱重法及比濁法等多種。本實驗采用比濁法測定。因為細菌懸液的濃度與渾濁度成正比,所以可利用光電比色計測定菌懸液的光密度來推知菌液的濃度,並將所測得的光密度值(OD 值)與其對應的培養時間作圖,即可繪出該菌在一定條件下的生長曲線(本試驗采用半對數坐標紙繪圖)。在曲線上對數生長期範圍內,任取兩個成倍的OD 值,其相對應的時間差即為該菌代時G。
材料
1.菌種:大腸杆菌(Escherichia coli)
2.培養基:250ml 三角瓶分裝100ml,18×180mm 試管分裝5ml LB 培養液。
3.滅菌物品:18×180mm 試管,10ml 吸管。
4.儀器:722 分光光度計,恒溫搖床。
5.其它:廢液缸,擦鏡紙,吸水紙,蒸餾水。
方法
1.種子液的培養:將大腸杆菌接入LB 培養液試管過夜培養至OD600 值為1。
2.接種:以無菌操作方式向100ml LB 培養液中加入10ml OD600 值為1 的大腸杆菌菌懸液,此時培養液OD600 值為0.1,並記錄為“0”時。
3.培養與測定:將接種後的培養液置於37℃下振蕩培養,定時取樣,每次均取5ml,然後以無菌培養液為對照,在722 光柵分光光度計上,測定OD600 值,並記錄。
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