一、實驗目的和內容
目的：了解細菌鞭毛染色的原理，掌握鞭毛染色法；學習觀察細菌運動的方法。
內容：1. 細菌的鞭毛染色法。
2．用壓滴法觀察細菌的運動。
3．用懸滴法觀察細菌的運動。
二、實驗材料和用具
普通變形菌(Proteus vulgaris)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)。
牛肉膏蛋白腖培養基斜麵、鞭毛染色液、0.01%美藍水溶液、香柏油、二甲苯、無菌水、凡士林；顯微鏡、擦鏡紙、接種環、酒精燈、載玻片、凹載玻片、蓋玻片、鑷子、細玻棒、吸水紙。
三、操作步驟
(一)細菌鞭毛染色
1．活化菌種 將保存的變形菌在新製備的普通牛肉膏蛋白腖斜麵培養基上連續移種2～3次，每次於30℃培養10～15h。活化後菌種備用。
2．製片 在幹淨載玻片的一端滴一滴蒸餾水，用無菌操作法，以接種環從活化菌種中取少許菌苔(注意不要帶培養基)，在載玻片的水滴中輕沾幾下。將載玻片稍傾斜，使菌液隨水滴緩緩流到另一端，然後平放，於空氣中幹燥。
3．染色
(1)滴加鞭毛染色液A液，染3～5min。
(2)用蒸餾水充分洗淨A液，使背景清潔。
(3)將殘水瀝幹或用B液衝去殘水。
(4)滴加B液，在微火上加熱使微冒蒸汽，並隨時補充染料以免幹涸，染30～60S。
(5)待冷卻後，用蒸餾水輕輕衝洗幹淨，自然幹燥或濾紙吸幹。
4．鏡檢 先用低倍鏡和高倍鏡找到典型區域，然後用油鏡觀察。菌體為深褐色，鞭毛為褐色。注意觀察鞭毛著生位置(鏡檢時應多找幾個視野，有時隻在部分塗片上染出鞭毛)。
(二)細菌運動的觀察
1．壓滴法
(1)製備菌液：從幼齡菌斜麵上，挑數環菌放在裝有1～2mL無菌水的試管中，製成輕度混濁的菌懸液。
(2)取2～3環稀釋菌液於潔淨載玻片中央，再加入一環0.01%的美藍水溶液，混勻。
(3)用鑷子夾一潔淨的蓋玻片，先使其一邊接觸菌液，然後慢慢地放下蓋玻片，這樣可防止產生氣泡。
(4)鏡檢：將光線適當調暗，先用低倍鏡找到觀察部位，再用高倍鏡觀察。要區分細菌鞭毛運動和布朗運動，後者隻是在原處左右擺動，細菌細胞間有明顯位移者，才能判定為有運動性。
2．懸滴法
(1)取潔淨蓋玻片，在四周塗少許凡士林。
(2)在蓋玻片中央滴一小滴菌液（圖9—1A）
(3)將凹玻片的凹窩向下，使凹窩中心對準蓋玻片中央的菌液(圖9-1B)，輕輕地蓋在蓋玻片上，便凹玻片與蓋玻片粘在一起(注意液滴不得與凹玻片接觸)。
(4)小心將玻片翻轉過來，使菌液正好懸在窩的中央。再用火柴棒輕壓蓋玻片四周使封閉，以防菌液幹燥。
（5）鏡檢：將光線適當調暗，先用低倍鏡找到懸滴的邊緣後(圖9—1D)，再將菌液移至視野中央，換用高倍鏡觀察，注意細菌是如何運動的，它與分子布朗運動的不同。
四、注意事項
1．鞭毛染色液最好當日配置當日用，次日使用則鞭毛染色淺，觀察效果差。染色時一定要充分洗淨A液後再加B液，否則背景不清晰。
2．觀察細菌的運動，載玻片和蓋玻片都要潔淨無油，否則會影響細菌的運動。有些細菌，溫度太低時不能運動。
五、實驗報告
1．繪出你所觀察到的細菌的形態及鞭毛著生情況。
2．試描述你所觀察的細菌有無運動性，是如何運動的?
六、問題和思考
1．鞭毛染色的菌種為什麽要先連續傳幾代，並且要采用幼齡菌種?
2．根據你的實驗體會，哪些因素影響鞭毛染色的效果?如何控製?
3．試設計一實驗，如何鑒別某種細菌是否能運動，是否有鞭毛，其鞭毛的著生位置。
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