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病毒動物接種法



錄入時間:2015-3-3 10:10:49 來源:青島betway必威西汉姆联生物

 病毒動物接種法

  實驗動物在病毒學研究中有四方麵用途:①分離鑒定病毒,如乙腦病毒;②連續傳代通過,以減弱有毒株對人的致病力,如狂犬病病毒;③製備抗血清;④病毒致病機理的研究。

  常用的實驗動物有小白鼠、地鼠、豚鼠、家兔、綿羊、雞、猴等。在病毒學研究中,動物接種時為避免動物本身可能帶有病毒,多采用實驗室自己繁殖的動物。首先根據研究目的選擇動物種類,對病毒致病機製的研究,則選擇愈接近人類的高等動物(例如靈長類)研究結果愈有價值;其次要注意動物的年齡、性別和接種的途徑等各種因素,一般年幼的動物比成年動物對病毒的敏感性高。至於接種的途徑應根據病毒的嗜性決定,例如腦炎病毒以腦內注射最敏感。

(一)小白鼠尾靜脈接種

【材料】

1. 動物:小白鼠

2. 病毒懸液

3. 碘酒、酒精、二甲苯、無菌0.25ml 注射器、4 號針頭及小鋁匣

【方法】

1. 將小白鼠固定在小鋁匣內,露出尾部,用碘酒消毒尾部,然後用酒精棉球連

續擦尾部皮膚(必要時用二甲苯擦)使血管擴張。

2. 尾背和左右兩側三根血管皆為靜脈,可選一根擴張較好的靜脈作接種用。左手拇指捏住尾部的遠端,向下彎45°,右手持注射器,於彎處進針靜脈,推液0.1毫升。

注意:推注時遇阻力且皮下隆起發白時,表示針頭不在血管內應拔出重新進針;如針頭在血管內,推注時不感阻力,且可看到血管中血液由於注入液體而後退。接種後逐日觀察動物發病情況。

(二)小白鼠鼻內接種(錄像)

【材料】

小白鼠、流感病毒鼠肺適應株病毒懸液、無菌小試管、無菌毛細管、麻醉用乙醚、棉球及小玻瓶。

【方法】

1. 首先將沾有乙醚的棉球放入一清潔小玻瓶內。左手握小瓶,右手抓住小白鼠,將其頭部塞入瓶口,進行全身麻醉。注意麻醉深度,不宜太淺或太深,太深時易遭致麻醉死亡或非特異性吸入性肺炎,太淺則易在滴種時打噴嚏。

2. 用無菌毛細吸管吸取病毒懸液少許,連同毛細吸管插在無菌試管中備用。

3. 用左手將小白鼠握在手掌中,大拇指及食指抓住小白鼠耳部使其頭部朝前並呈仰臥位置,另一手取事先吸有病毒懸液的吸管,慢慢滴出一點於滴管口而不使其自然掉落,呈懸滴狀。將懸滴靠近動物鼻尖,動物在呼吸時自然吸入,一般為0.030.05 毫升,不宜過多。

4. 小白鼠慢慢蘇醒,在飼養盒中逐日開始發病,發病的症狀常為毛聳、咳嗽、不食、甚至死亡。解剖屍體可觀察到肺炎或血性病灶。

(三)小白鼠腦內接種

【材料】

腦炎病毒(小白鼠腦脊髓炎病毒)懸液。腦組織先用無菌生理鹽水洗去血液,再加10%脫脂奶鹽水研磨成101 懸液,然後用3000 /分離心沉澱30 分鍾,吸取上清液供接種用。

小白鼠:3 周齡,體重68 克。無菌 0.25 毫升注射器及針頭(4 號)、煮針鍋、碘酊、棉簽。

【方法】

1. 以無菌0.25 毫升注射器抽取腦炎病毒懸液0.1 毫升,去除注射器內的氣泡。

2. 取出小白鼠,左手將小白鼠固定,固定時用大拇指和食指捏住小白鼠的頭部,左手手掌輕輕按住小白鼠的體部。

3. 右手以棉簽蘸以碘酒,消毒小白鼠顳部皮毛(不碰到眼)。

4. 右手拿注射器在小白鼠顳部(眼與耳根連線的中點略偏耳朵的方向)刺入,進入顱腔,進針23 毫米,不要插得太深,注射量為0.020.03 毫升。

5. 注射完畢,將用過得注射器放入煮針鍋內煮沸消毒。動物一般在34 天後開始發病,食欲減退,活動遲鈍,毛聳,震顫,慢慢發展為麻痹,癱瘓而死亡。

本法適用於一些腦炎病毒的分離培養。

 

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