【材料】
1.標本:膿汁或喉拭子。
2.培養基:血瓊脂平扳、甘露醇發酵管、菊糖發酵管。
3.兔血漿、生理鹽水、毛細滴管、吸管、小試管、試管架、革蘭染液、玻片。
【方法】
1.將膿汁或喉拭子作塗片(注意先分離培養,後作塗片,避免汙染),革蘭染色後鏡檢,觀察細菌形態、排列及染色性。
2.將膿汁或喉拭子材料接種血瓊脂平板,置37℃培養18~24 小時。
3.根據菌落特點及塗片檢查結果,作出初步判斷,必要時再作進一步鑒定。
(1)若菌落中等大小、完全溶血、不透明、產生金黃色色素、塗片革蘭染色陽性,葡萄狀排列,可能是金黃色葡萄球菌,可進一步做血漿凝固酶試驗和甘露醇發酵試驗,確定其致病力。
(2)若菌落較小、半透明、完全溶血、塗片革蘭染色陽性 、大都呈鏈狀排列,為乙型鏈球菌。
(3)若菌落較小、半透明、綠色不完全溶血環,塗片革蘭染色陽性 、呈短鏈狀排列,為甲型鏈球菌或肺炎鏈球菌,需要進一步鑒別,可作膽汁溶菌和菊糖發酵試驗。學生通過判別做進一步的實驗(甘露醇發酵和菊糖發酵試驗)。將接種後的甘露醇發酵管和菊糖發酵管放入37℃孵箱。
附錄:
血瓊脂平板培養基:加熱融化pH7.6 的肉湯瓊脂培養基100 毫升,冷至45℃~50℃時,以無菌操作加入脫纖維的兔血或羊血5~10 毫升。搖勻後傾注平板,冷凝後即成。37℃孵譽24 小時,無菌生長,即可使用。血瓊脂平板是營養培養基,因血液內含多種營養物質,可促進營養要求較高的細菌的生長。血瓊脂平板也可用來檢測細菌的溶血性。血液不耐熱,故需待瓊脂稍冷後才能加入。
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