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生物因素對細菌的影響



錄入時間:2015-3-2 9:28:57 來源:青島betway必威西汉姆联生物

 生物因素對細菌的影響

() 細菌對抗生素的敏感性測定 (藥敏試驗)

【材料】

金黃色葡萄球菌、痢疾杆菌18~24 小時肉湯培養液、瓊脂平板培養基、抗生素紙片(浸沾一定濃度的青、鏈、氯、慶大黴素後,37℃烘幹備用)、尖頭鑷子。

【方法】

1. 取瓊脂平板培養基 2 塊,分別於其底部玻璃上注明金黃色葡萄球菌及痢疾杆菌,並用蠟筆將平皿底部劃分四等分,分別注明青、鏈、氯、慶大黴素。

2. 將二菌菌液分別塗於上述二個培養基平板上。

3. 鑷子經火焰滅菌,鑷取各藥物紙片,分別貼於塗有細菌的培養基平板表麵相應位置上。

4. 置 37℃中孵育18~24 小時,觀察紙片周圍有無抑菌圈,並比較各抑菌圈的大小,判斷二菌對抗生素的敏感度。

附:紙片法藥敏試驗紙片含藥量和結果解釋(NCCLS 1998 年)

NCCLS:美國臨床實驗室標準化委員會

() 噬菌體對細菌的作用—特異性裂解試驗 (平板法)

【材料】

大腸杆菌及痢疾杆菌瓊脂斜麵培養物、瓊脂平板培養基、痢疾杆菌噬菌體。

【方法】

1. 取瓊脂平板一隻並劃分三等,分別標明 123

2. 以接種環將痢疾杆菌分別密塗於 13 兩處,2 處塗布大腸杆菌。

3. 用接種環沾取痢疾杆菌噬菌體加於 12 處的中央,另取l 接種環肉湯放於3 處中央。

4. 將此培養基平板置 37℃孵育12~24 小時,觀察噬菌斑出現的位置加以分析。

附錄:

一、單糖發酵管培養基製備:配製各種單糖成 20%濃度的水溶液,8 磅蒸汽壓力下滅菌15 分鍾。取pH76 的蛋白腖水1000 毫升,加入16%溴甲酚紫液1 毫升,混合後分裝於內置一支玻璃小倒管的10×100 毫米試管,每管約34 毫升,15磅蒸汽壓力下滅菌15 分鍾。取出後各管貼上顏色標簽或在棉塞上染以顏色。在細菌學中,通常紅色代表葡萄糖、黃色代表乳糖、白色甘露醇、紫色麥牙糖等,最後以無菌操作加入相應的滅菌糖溶液至每管中,使最終濃度為l%。

二、IMViC試驗所需培養基,試劑

(一)培養基

1. 蛋白腖水:將蛋白腖10 克、氯化鈉5 克溶解於蒸餾水1000 毫升中,調整酸堿度至 pH7.615 磅蒸汽壓下滅菌20 分種,若作吲哚試驗者,宜采用多腖,因其中含色氨酸較多。

2. 葡萄糖蛋白腖水:溶解蛋白腖5 克,葡萄糖5 克、磷酸氫二鉀5 克於蒸餾水 1000 毫升中,調整至pH7.2,濾紙過濾,分裝後,經8 磅蒸汽滅菌15 分鍾。

3. 枸櫞酸鹽斜麵培養基:溶解磷酸二氫銨0.1 克、硫酸鎂0.02 克、磷酸氫二鉀 0.1 克、枸櫞酸鈉0.2 克、氯化鈉0.5 克於蒸餾水100 毫升中,加入瓊脂2克。加熱溶化之。酸堿度調整至pH68,加入指示劑0.5%溴麝香草酚蘭酒精溶液2 毫升。搖勻,脫脂棉過濾,分裝,15 磅蒸汽壓下滅菌20 分鍾,趁熱製成斜麵。製就的枸櫞酸鹽培養基應呈綠色。

()試劑

1. 甲基紅試劑:稱取甲基紅粉劑 0.1 ,溶於95%酒精300 毫升中,再以蒸餾水稀釋至 500 毫升。

2. 對二甲基氨基苯甲醛(吲哚試劑):對二甲基氨基苯甲醛5g 與戊醇或丁醇 75 毫升混合,置5060℃水浴箱中過夜。次日取出,徐徐滴入濃鹽酸25 毫升,滴加時隨滴隨搖。配後放暗處備用。

(三)其他生化反應用培養基

1. 醋酸鉛培養基:加熱融化2%肉湯瓊脂200 毫升,加入硫代硫酸鈉0.5克。混合後,15 磅蒸汽壓下滅菌20 分鍾。待冷至45,無菌操作加入經間歇滅菌的10%醋酸溶液1 毫升。分裝、直立靜置待凝。

2. 尿素固體培養基:取蛋白腖0.1 克、氯化鈉0.5 克,磷酸二氫鉀0.2克、瓊脂2 克於蒸餾水100 毫升中,加熱溶化。調正pH 7.4,脫脂棉過濾。加入0.6%酚紅0.2 毫升,混勻,8 磅蒸汽壓下滅菌15 分鍾。冷至60℃時,每100 毫升加入l0%無菌葡萄糖液l 毫升及20%尿素液1 毫升(尿素液應經蔡氏濾菌器過濾除菌)。混合,分裝,每管裝2~3 毫升,製成斜麵。

(四)常用指示劑的變色範圍。

 

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