目的
1．學習並掌握噬菌體效價的含義及其測定原理。
2．學習並掌握雙層瓊脂平板法測定噬菌體效價。
原理
噬菌體屬於細菌病毒，它不具備完整的細胞結構，隻能通過寄主細胞完成自我複製。因此人類隻有通過電子顯微鏡才可觀察到它們的形態結構。但是，由於噬菌體侵染細菌細胞後，可導致寄主細胞溶解死亡，並在瓊脂培養基表麵形成空斑-噬菌斑（Plaque），所以人們可以此來判斷噬菌體的存在。
噬菌體的效價即：每毫升培養液中含有具感染性噬菌體的數量。它的測定常用雙層瓊脂平板法。由此法得到的噬菌斑形態、大小較一致，且清晰度高，計算準確。該方法首先在無菌培養皿內倒入營養瓊脂作為底層，然後將適當稀釋的噬菌體與培養至對數期的受體菌混合，保溫吸附後，加入冷卻至45℃左右的半固體瓊脂糖，迅速混勻後鋪平板，作為上層, 最後倒置培養。隻要噬菌體具有感染力就可形成噬菌斑。根據不同稀釋度平板上出現的噬菌斑數目，即可算出原液噬菌體的效價。
公式為： 噬菌斑形成單位（pfu/ml）= 噬菌斑數×稀釋倍數×10
本實驗選擇的λ 噬菌體EA94， 是一被改造的烈性噬菌體。
材料
1．菌種：大腸杆菌（Escherichia coli）LE392
2．噬菌體：λ 噬菌體EA94
3．培養基：300 ml 三角瓶中分裝100ml LB 培養基，300 ml 三角瓶中分裝150 ml LB 固體培養基，15×150mm 試管分裝3.5 ml 0.7%瓊脂糖。
4．滅菌物品：20%麥芽糖，1mol/L MgSO4，10 mmol/L MgSO4，18×180mm 試管分裝9 ml和20 ml 噬菌體緩衝液（20 mmol/L Tris pH 7.4，100 mmol/L NaCl，10 mmol/L MgSO4），100ml 離心管，100μl 槍頭，微離心管，培養皿。
5．儀器：取樣器，恒溫水浴鍋，恒溫培養箱，台式離心機。
方法
1．製底層平板：將融化並冷卻至45℃左右的LB 培養基倒入無菌培養皿，每皿約10-12 ml，共9 皿， 水平放置，凝固後，作好稀釋度標記備用；
2．製備噬菌體稀釋液：取20μL 噬菌體原液於19.98 ml 緩衝液中得到1000 倍（10－3）稀釋液。再取1 ml 10－3 稀釋液於9 ml 緩衝液中得到10－4 稀釋液，依次類推直至10－7 稀釋液，並在試管上作好相應標記備用；
3．製備受體菌細胞：將活化的大腸杆菌接種於50ml 牛肉膏蛋白腖培養液（內含0.5ml 20%麥芽糖和0.5ml 1mol/L MgSO4）中，經過夜培養後，離心收集菌體細胞，然後懸浮於20 ml 10mmol/L MgSO4.7H2O 中，備用；
4．吸附：用取樣器分別取100μl 10－5、10－6、10－7 噬菌體稀釋液和100μl 受體菌細胞液，充分混和後置於37℃恒溫箱中保溫25 分鍾，並在微離心管上作好相應標記；
5．製上層平板：用取樣器分別取出全部混合液加入到冷卻至45℃左右的0.7%瓊脂糖中，迅速混勻後，倒在有相應標記的底層平板上，邊倒邊在台麵上搖勻，使上層培養基迅速鋪滿整個平皿；
6．培養：37℃倒置培養15-18 小時後，檢查結果。
結果
記錄平板上出現的噬菌斑數，並計算噬菌體原液的效價。
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