4.2.6 陽性誘變劑的配製
根據所選擇的誘變劑的種類和劑量用適當的溶媒配製陽性對照品(見附錄B、附錄C)。
注：培養基成分或試劑除特殊說明外至少應是化學純，無誘變性。避免重複高溫處理，選擇適當保存溫度和期限。
4.3 10％S9混合液的製備
4.3.1 S9輔助因子的配製
4.3.1.1 鎂鉀溶液
氯化鎂1．9 g和氯化鉀6．15 g加蒸餾水溶解至100 mL。
4.3.1.2 磷酸鹽緩衝液(0.2mol／L)(pH7．4)
磷酸氫二鈉(28．4 g／L) 440 mL
磷酸二氫鈉(27．6 g／L) 60 mL
調pH至7.4，0.103 MPa滅菌20 min或濾菌。
4.3.1.3 輔酶-Ⅱ(氧化型)溶液
無菌條件下稱取輔酶Ⅱ，用無菌蒸餾水溶解配製成溶液(0.025mol／L)，現用現配。
4.3.1.4 葡萄糖-6-磷酸鈉鹽溶液
無菌條件下稱取葡萄糖-6-磷酸鈉鹽，用無菌蒸餾水溶解配製成溶液(0.05 mol／L)，現用現配。
4.3.2 大鼠肝S9組分的誘導和配製
選健康雄性成年SD或Wistar大鼠，體重150g～200g，周齡約5周～6周。將多氯聯苯
(Aroclorl254)溶於玉米油中，濃度為200 g／L。，按500mg／kg體重無菌操作一次腹腔注射，5d後處死
動物，處死前禁食12h。
也可采用苯巴比妥鈉和β-萘黃酮聯合誘導的方法進行製備，經口灌胃給予大鼠苯巴比妥鈉和β萘
黃酮，劑量均為80 mg／kg，連續3d，禁食16 h後斷頭處死動物。其他操作同多氯聯苯誘導。
處死動物後取出肝髒，稱重後用新鮮冰冷的氯化鉀溶液(0.15 mol／L)連續衝洗肝髒數次，以
便除去能抑製微粒體酶活性的血紅蛋白。每克肝(濕重)加氯化鉀溶液0.1mol／L)3 mL，連同燒杯
移入冰浴中，用無菌剪刀剪碎肝髒，在玻璃勻漿器(低於4000 r／min，1min～2 min)或組織勻漿器(低
於20000 r／min，1min)中製成肝勻漿。以上操作需注意無菌和局部冷環境。
將製成的肝勻漿在低溫(0℃～4℃)高速離心機上以9000g離心10 min，吸m上清液為S9組分，
分裝於無菌冷凍管或安瓿中，每安瓿2 mL左右，用液氮或幹冰速凍後置80℃低溫保存。
S9組分製成後，經無菌檢查，測定蛋白含量(Lowry法)，每毫升蛋白含量不超過40mg為宜，並經
間接致癌物(誘變劑)鑒定其生物活性合格後貯存於深低溫或冰凍幹燥，保存期不超過1年。
4.3.3 10％S9混合液的製備
10％S9混合液一般由S9組分和輔助因子按1：9組成，也可將濃度配製成30％(不同受試物所需
S9濃度不同)，臨用時新鮮無菌配製，或過濾除菌。10％S9混合液10 mL配製如下：
磷酸鹽緩衝液 6．0mL
鎂鉀溶液 0．4mL
葡萄糖-6-磷酸鈉鹽溶液 1．0 mL
輔酶Ⅱ溶液 1．6 mL
肝S9組分 1．0 mL
混勻，置冰浴中待用。
用每平板0.5 mL S9混合液(含20μL～50μL S9)測定其對已知陽性致癌物(誘變劑)的生物活性，
確定最適用量。也可按一般用量，即每平皿0.5 mL S9混合液。
