微生物菌落的觀察
一、實驗目的和內容
目的:識別細菌、酵母菌、放線菌和黴菌四大類微生物的菌落特征。
內容:
1.觀察已知菌的菌落的形態、大小、色澤、透明度、致密度和邊緣等特征。
2.根據菌落的形態特征判斷未知菌的類別。
二、實驗材料和用具
大腸杆菌(E.coli)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、粘紅酵母(Rhodotorula gracitis)、熱帶假絲酵母(Candida tropicalis)、細黃鏈黴菌(Streptomyces microflavus,又稱“5406”抗生菌)、灰色鏈黴菌(Streptomyces griseus )、黑曲黴(Aspergillus niger )、產黃青黴(Penicillium chrysogenum)、球孢白伍菌(Beauveria bassiana)等細菌的斜麵菌種。
牛肉膏蛋白腖培養基、馬鈴薯培養基、高氏1號培養基、無菌水。
接種環、接種針、酒精燈、無菌培養皿多套、電熱恒溫箱。
三、操作步驟
(一)製備已知菌的單菌落
1.製備平板 將已融化的無菌培養基待冷卻至50℃左右,分別製備牛肉膏蛋白腖培養基平板、馬鈴薯蔗糖培養基平板和高氏1號培養基平板各一皿。
2.製備菌懸液或孢子懸液 在培養好的斜麵菌種管內加入5mL無菌水,製成菌懸液後備用。
3.製備單菌落 通過平板劃線法獲得細菌、酵母菌和放線菌的單菌落。用三點接種法獲得黴菌的單菌落。細菌於37℃恒溫培養24~48h,酵母菌於28℃培養2~3d,黴菌和放線菌置28℃培養5~7d,待長成菌落後,仔細觀察四大類微生物菌落的形態特征,並將觀察結果記錄於表4-1中。
(二)製備未知菌落
l.倒平板
2.接種 可用彈土法接種,其要點為:采集校園土壤,待風幹磨碎後,可將細土撒在無菌的硬板紙表麵,先彈去紙麵浮土,然後打開皿蓋,便含土的紙麵對著平板培養基的表麵,用手指在硬板紙背麵輕輕一彈即可接種上各種微生物。
3.培養 將牛肉膏蛋白腖培養基平板倒置於37℃培養箱中恒溫培養2~3d,將馬鈴薯蔗糖培養基倒置於28℃培養箱中恒溫培養3~5d,即可獲得未知菌的單菌落。
4.編號 從培養好的未知平板中,挑選8個不同的單菌落,逐個編號,根據菌落識別要點區分未知菌落類群,並將判斷結果填入表4~2中。
(三)直接觀察菌落
直接用實驗3中的“土壤稀釋分離”獲得的單菌落進行觀察識別,並將結果填入表4-2中。
四、注意事項
觀察菌落特點時,要選擇分離得很開的單個較大菌落;已知菌落和未知菌落要編好號,請勿隨意移動開蓋,以免搞混菌號。
五、實驗報告
1.已知菌落的形態特征記錄於表4~1中。
2.將未知菌落的辨別結果記錄於表4~2中。
七、問題和思考
1.試比較細菌、放線菌、酵母菌和黴菌菌落形態的差異?
2.設計一個實驗,檢測實驗室空氣環境中的微生物類別?
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