革蘭氏陽性；
小的、類似球形杆菌，0.4~0.5×0.5~2µm，在有些培養基中稍彎，兩端鈍圓，單個、成短鏈、細胞彼此連成V形，或成群的細胞沿長軸方向平行排列，在較老的或生長不良的培養物中，可能形成絲狀；
20-25℃以4根周生鞭毛運動，在37℃隻有較少的鞭毛或1根鞭毛；周毛易脫落。
無芽孢、兼性厭氧、一般不形成莢膜，但在營養豐富的環境中可形成莢膜，在陳舊培養中的菌體可呈絲狀及革蘭氏陰性。
兼性厭氧；
該菌營養要求不高，在20--35℃培養有動力，穿刺培養2－5天可見傘狀生長，肉湯培養物在顯微鏡下可見翻跟鬥運動。
最適培養溫度為30--37℃。
pH範圍pH4.4-pH9.6。
在固體培養基上，菌落初始很小，透明，邊緣整齊，呈露滴狀，但隨著菌落的增大，變得不透明。
在5-7%的血平板上，菌落通常也不大，灰白色，刺種血平板培養後可產生窄小的β-溶血環。
在0.6%酵母浸膏胰酪大豆瓊脂(TSA-YE)瓊脂上，通過解剖鏡垂直觀察，菌落呈蘭色、灰色或蘭灰色。
觸酶陽性，氧化酶陰性。
能發酵多種糖類，產酸不產氣。
發酵葡萄糖、乳糖、水楊素、麥芽糖、鼠李糖、七葉苷、蔗糖（遲發酵）、山梨醇、海藻糖、果糖；
不發酵木糖、甘露醇、肌醇、阿拉伯糖、側金盞花醇、棉子糖、衛矛醇和纖維二糖。
不利用枸櫞酸鹽，40%膽汁不溶解，吲哚、硫化氫、尿素、明膠液化、硝酸鹽還原、賴氨酸、鳥氨酸均陰性；
VP、甲基紅試驗和精氨酸水解陽性。
根據菌體（O）抗原和鞭毛(H)抗原，將單增利斯菌分成13個血清型，分別是1/2a、1/2b、1/2c、3a、3b、3c、4a、4b、4ab、4c、4d、4e 和 “7”。
致病菌株的血清型一般有8個型：1/2b、1/2c、3a、3b、3c、4a、1/2a和4b,後兩型尤多。
該菌對理化因素抵抗力較強，是無芽胞細菌中抵抗力最強的細菌；
對堿和鹽抵抗力強，60-70℃經5-20min可殺死，70%酒精5min、2.5%石炭酸、2.5%氫氧化鈉、2.5%福爾馬林20min 可殺死此菌；
濕熱滅菌（121℃，至少15min）和幹熱滅菌（160-170℃，至少1hr）可殺滅該菌，對紫外線和γ射線敏感；
該菌對青黴素、氨苄青黴素、四環素（已產生抗性）、氨基糖苷類、氯黴素均敏感。
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