原理：檢樣經過 80 ℃殺菌後，添加嗜熱鏈球菌菌液。培養一段時間後，嗜熱鏈球菌開始增殖。這時候加入代謝底物 TTC，若該樣品中不含有抗生素或抗生素的濃度低於檢測限，嗜熱鏈球菌將繼續增殖，還原 TTC 成為紅色物質。相反，如果樣品中含有高於檢測限的抑菌劑，則嗜熱鏈球菌受到抑製，因此指示劑 TTC 不還原，保持原色。
活化菌種：取一接種環嗜熱鏈球菌菌種，接種在 9 mL 滅菌脫脂乳中，36 ℃±1 ℃培養 12 h～15h 後，置 2 ℃～5 ℃冰箱保存備用。每15 d 轉種一次。
測試菌液：將經過活化的嗜熱鏈球菌菌種接種滅菌脫脂乳，36 ℃±1 ℃培養 15 h±1 h，加入相 同體積的滅菌脫脂乳混勻稀釋成為測試菌液。
培養操作：取檢樣 9 mL，置 18 mm×180 mm 試管內，每份檢樣另外做一份平行樣。同時再作陰性和陽性對照各一份，陽性對照管用 9 mL 青黴素 G 參照溶液，陰性對照管用滅菌脫脂乳 9 mL。所有裝有樣品的試管置 80 ℃水浴加熱 5 min，冷卻至 37 ℃以下，加入測試菌液1 mL，輕輕旋轉試管混勻。36 ℃±1 ℃水浴培養 2 h，加 4％TTC 水溶液 0.3 mL，在旋渦混勻器上混合 15 s 或振動試管保證液體與樣品混勻。36 ℃±1 ℃水浴避光培養 30 min，觀察顏色變化。如果顏色沒有變化，於水浴中繼續避光培養 30 min 作最終觀察。觀察時要迅速，避免光照過久出現幹擾。
判斷方法：在白色背景前觀察，檢樣呈乳的原色時，指示乳中有抗生素存在，為陽性結果。檢樣呈紅色為陰性結果。如最終觀察現象仍為可疑，建議重新檢測。
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