芽孢懸液：將嗜熱脂肪芽孢杆菌菌種劃線移種於營養瓊脂平板表麵，56 ℃培養 24 h 後挑取乳白色半透明圓形特征菌落，在營養瓊脂平板上再次劃線培養，56 ℃培養24 h 後轉入 36 ℃培養 3 d～4 d，鏡檢芽孢產率達到 95%以上時進行芽孢懸液的製備。每 塊平板用 1 mL～3 mL無菌磷酸鹽緩衝液洗脫培養基表麵的菌苔（如果使用克氏瓶，每瓶使用無菌磷酸鹽緩衝液 10 mL～20 mL）。將洗脫液 5 000 r/min離心 15 min。取沉澱物加無菌0.03 mol/L 磷酸鹽緩衝液（pH 7.2）製成 10 ９ cfu/mL 芽孢懸液，置 80 ℃恒溫水浴中 10 min 後，密封防止水分蒸發，置冰箱保存備用。
測試培養基：在溴甲酚紫葡萄糖蛋白腖培養基中加入適量芽孢懸液，混合均勻，使最終的芽孢濃度為 8×10 ５ ～2×10 ６ cfu/mL。混合芽孢懸液的溴甲酚紫葡萄糖蛋白腖培養基分裝小試管，每管 200 μL，密封防止水分蒸發。這樣配製好的測試培養基可以在冰箱保存 6 個月。
培養操作：吸 取樣品100 μL加入含有芽孢的測試培養基中，輕 輕旋轉試管混勻。每 份檢樣作二份，另外再作陰性和陽性對照各一份，陽性對照管為 100 μL 青黴素 G 參照溶液，陰性對照管為 100 μL 無抗生素的脫脂乳。於 65℃水浴培養 2.5 h，觀察培養基顏色的變化。如果顏色沒有變化，須再於水浴中培養 30 min 作最終觀察。
判斷方法：在白色背景前從側麵和底部觀察小試管內培養基顏色。保持培養基原有的紫色為陽性結果，培養基變成黃色或黃綠色為陰性結果，顏色處於二者之間，為可疑結果。對於可疑結果應繼續培養30 min 再進行最終觀察。如果培養基顏色仍然處於黃色－紫色之間，表示抗生素濃度接近方法的最低檢出限，此時建議重新檢測一次。
報告:
最終觀察時，培養基依然保持原有的紫色，可以報告為抗生素殘留陽性。
培養基變為呈黃色或黃綠色時，可以報告為抗生素殘留陰性。
本方法檢測幾種常見抗生素的最低檢出限為：青黴素3 μg/L，鏈黴素 50 μg/L，慶大黴素 30 μg/L，卡那黴素 50 μg/L。
下一篇：酶聯免疫吸附試驗-競爭法
