操作步驟
6.1 樣品處理及增菌
按無菌操作稱取檢樣 按無菌操作稱取檢樣 按無菌操作稱取檢樣 按無菌操作稱取檢樣 按無菌操作稱取檢樣 25 g (mL )加 入盛有225 mLTSB的均質袋中,用拍擊式器1 min~ 2 min ;或加入盛有 225 mL TSB 的均質杯中,以 8000 r/min~10000 r/min 均質1 min~2 min。若樣品為 液態,振蕩均勻即可。 36 ℃ ±1 ℃培養 18 h ~24 h 。
6.2 分離
將增菌液劃線接種於哥倫比亞CNACNACNA血瓊脂平板, 血瓊脂平板,36 ℃±1 ℃厭氧培養18 h ~24 h ,觀察菌落形態。
溶血性鏈球菌在哥倫比亞 CNACNACNA血瓊脂平板上的 典型菌落 形態為 直徑 約 2 mm ~3 mm ,灰白色、半透
明光滑表麵突起圓形邊緣整齊,並產生 β 型溶血。
6.3 鑒定
6.3.1 分純培養
挑取 5個( 如小於 5個則全選) 可疑菌落分別接種哥倫比亞血瓊脂平板和 TSB 增菌液, 36 ℃ ±1 ℃ 培養 18 h ~24 h 。
6.3.2 革蘭氏染色鏡檢
挑取可疑菌落染色鏡檢。 β 型溶血性鏈球菌球形或卵圓為革蘭氏染色陽性, 球形或卵圓常排列成短鏈狀
6.3.3 觸酶試驗
挑取可疑菌落於潔淨的載玻片上,滴加適量 滴加適量 3% 過氧化氫溶液,立即產生氣泡者為陽性。β 型溶血性 型溶血性 鏈球菌觸酶為陰性。 6.3.4 鏈激酶試驗(選做項目)
吸取草酸鉀血漿0.2 mL於 0.8 mL滅菌生理鹽水中混勻,再加入經 36 ℃±1 ℃培養 18 h ~24 h 的可 疑菌的TSB培養液0.5 mL及 0.25% 氯化鈣溶液0.25 mL,振蕩搖勻置於36 ℃±1 ℃水浴中10 min,血 漿混合物自行凝固(程度至試管倒置,內容不流動)。繼續 36 ℃±1 ℃培養24 h ,重新完全溶解為陽性 ,不陰
6.3.5 其他檢驗
使用生化鑒定試劑盒或卡對可疑菌落進行。
7 結果與報告
綜合以上試驗結果,報告每 25 g (mL )檢樣中出或未溶血性鏈球
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