檢測TSAye平板上的典型菌落形態，用斜射光觀察是非常有幫助，但不是必須的。
從30℃或低於30℃培養的平板上挑取生長良好的典型菌落，塗於潔淨載玻片上，用0.85%生理鹽水製成懸浮液，壓上蓋玻片於相差顯微鏡的油鏡下觀察。李斯特氏菌為短杆狀，有輕微的旋轉和翻滾運動。而大的杆狀，或快速運動的杆狀細菌則不是李斯特氏菌。應用陽性的李斯特氏菌做對照。
過氧化氫酶試驗：李斯特氏菌陽性反應。
革蘭氏染色試驗：將培養16-24小時的培養物進行染色。李斯特氏菌呈短杆狀陽性菌。但若培養時間過長，染色會發生變化。細胞呈現Coccoidal菌現象。著色輕的部位呈現柵欄狀，被當作類白喉菌排除掉。
挑取典型菌落接種到TSBye培養基(進行糖發酵試驗)和其它檢測培養基上，35℃培養24小時，這些培養物可置於4℃冰箱中保存數天，以重複利用。商業化的試劑盒也可於分離鑒定(見E-11)。
溶血試驗：將7%羊血瓊脂平板底麵劃分為20-25個小格，從TSAye上挑取菌落刺種到血平板上，每格刺種一個菌落，並刺種陽性對照菌(單增李斯特氏菌和綿羊李斯特氏菌)和陰性對照菌(英諾克李斯特氏菌)，於35℃培養24-48小時，穿刺時盡量接近底部，但不要觸到底麵，同時避免瓊脂破裂。
於明亮處觀察潔淨的血瓊脂平板，單增李斯特氏菌和西爾李斯特氏菌在刺種點周圍產生狹小的透明溶血環，英諾克李斯特氏菌無溶血環，綿羊李斯特氏菌產生大的透明溶血環。注意：不要據此來區別李斯特氏各種菌，僅僅是一種溶血現象。用CAMP試驗來確證李斯特氏各種菌。(注意：當血平板的厚度比通常的5mm更薄時，非常容易觀察到溶血環，另外這可以通過覆蓋一層血瓊脂1-2mm來實現)。
硝酸鹽還原試驗：這個試驗是非必需的。隻有默氏李斯特氏菌能降解硝酸鹽，從而區別開格氏李斯特氏菌和默氏李斯特氏菌。用TSBye肉湯培養物接種到硝酸鹽肉湯中，35℃培養5天，加入0.2ml試劑A，再加入0.2ml試劑B，混勻，如出現紫紅色，則表明降解了硝酸鹽，存在亞硝酸鹽。如無顏色變化，則加入少量鋅粉，放置1小時，如出現紅色，表明仍有硝酸鹽存在，未被細菌降解。也可按以下過程進行檢測:加入0.2ml試劑A，再加入0.2ml試劑C，混勻，如出現桔紅色，則表明降解了硝酸鹽，存在亞硝酸鹽。如無顏色變化，則加入少量鋅粉，放置1小時，如出現桔紅色，表明仍有硝酸鹽存在，未被細菌降解。
動力試驗：由TSBye肉湯培養物接種到SIM培養基或MTM培養基， 室溫培養7天，逐日觀察，李斯特氏菌有動力，呈傘狀生長。MTM培養基上形狀尤為突出，可以明顯觀察到傘形。另外，通過相差顯微鏡，可以觀察30℃ TSBye培養基上的培養物的翻滾運動。
將TSBye上培養物接種於含以下0.5%糖的紫色肉湯中(可加入小倒管)：葡萄糖、七葉苷、麥芽糖、甘露醇、鼠李糖和木糖。35℃培養7天。陽性反應是產酸不產氣。不同菌種的生化反應見表1。所有李斯特氏菌對葡萄糖、七葉苷、麥芽糖都是陽性反應。除格氏李斯特氏菌和默氏李斯特氏菌外的李斯特氏菌對甘露醇呈陰性反應。若OXA、PALCAM、MOX或LPM(加七葉苷和三價鐵)的純化物著色是確定的，則七葉苷發酵實驗可省略
CAMP試驗：當溶血試驗結果不確定時，可用CAMP實驗來區別李斯特氏菌的各個種。在羊血瓊脂平板上劃兩條平行線，兩條線上分別接種β型溶血金黃色葡萄球菌與馬紅球菌培養物。在該兩線之間，垂直劃線，接種待測培養物，與兩線相近但不相交，於35℃培養24-48小時後，觀察溶血情況。單增李斯特氏菌與西爾李斯特氏菌在靠近金黃色葡萄球菌接種點附近的溶血增強，其它李斯特氏菌不溶血。單增李斯特氏菌在24小時溶血現象比在48小時更明顯。為使馬紅球菌能長出一條很好的劃線，需要將斜麵培養物培養48小時，而不是24小時。同時，羊血瓊脂平板需新鮮配製。
下一篇：ISO檢測方法單增李斯特菌
