在24和48h時,挑取BLEB上的菌落劃線接種於任何一種含七葉苷的選擇分離培養基上：OXA、PALCAM、MOX或加入七葉苷和三價鐵的LPM。以上含七葉苷的培養基根據具體要求而選用。OXA、PALCAM、MOX平板接菌後放置於35℃培養24-48小時，含七葉苷和三價鐵的LPM平板接菌後放置於30℃培養24-48小時。特別推薦以下單增李斯特氏菌與綿羊李斯特氏菌所用的選擇性顯色培養基，例如BCM、ALOA等培養基培養48小時( 也可培養24小時)，這樣可以減少綿羊李斯特氏菌掩蓋單增李斯特氏菌。
在含七葉苷的培養基上，李氏菌呈黒色，菌落周圍具有黒色的環。一些其它的細菌在兩天以後或更長的時間，能夠形成淡棕黒色的菌落。
從OXA、PALCAM、改良LPM培養基或MOX培養基上，
挑取5個典型菌落劃線接種到TSAye培養基上，分離純化單菌落。同樣也可劃線接種到BCM培養基，單增李斯特氏菌呈藍色，而綿羊李斯特氏菌在食品中不常見。單增李斯特氏菌和綿羊李斯特氏菌在ALOA培養基下都呈藍色且在菌落周圍有酯酶環。在傳統的檢測方法中，利用TSAye培養基進行菌落純化是必須的，因為選擇性培養基上分離出的菌落仍有可能包涵有其它細菌。至少挑取5個菌落，由於在同一樣品中可能含有幾種李斯特氏菌。BCM和ALOA培養基可以減少挑取的菌落數。運用商業的Confirmatory培養基，或傳統的木糖/鼠李糖發酵肉湯或瓊脂，可以區別單增李斯特氏菌和綿羊李斯特氏菌。TSAye平板需在30℃培養24-48小時，若不需觀察運動，也可在35℃培養。
從上麵FDA的方法中，可知所采用的選擇性分離平板為OXA或PALCAM或MOX或改良LPM培養基，從中選取一種即可，同時FDA特別重點推薦采用李斯特氏菌顯色培養基。
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