取庖肉培養基3支，煮沸10～15min，做如下處理：
第一支：急速冷卻，接種檢樣均質液1～2mL ；
第二支：冷卻至60℃，接種檢樣，繼續於60℃保溫 10min， 急速冷卻；
第三支：接種檢樣，繼續煮沸加熱10min，急速冷卻。
以上接種物於30℃培養5d，若無生長，可再培養10d。培養到期，若有生長，取培養液離心，以其上清液進行毒素檢測試驗，方法同6.1，陽性結果證明檢樣中有肉毒梭菌存在。
分離培養
選取經毒素檢測試驗證實含有肉毒梭菌的前述增菌產毒培養物(必要時可重複一次適宜的加熱處理)接種卵黃瓊脂平板，35℃厭氧培養48h。肉毒梭菌在卵黃瓊脂平板上生長時，菌落及周圍培養基表麵覆蓋著特有的虹彩樣(或珍珠層樣)薄層，但G型菌無此現象。根據菌落形態及菌體形態挑取可疑菌落，接種庖肉培養基，於30℃培養5d，進行毒素檢測及培養特性檢查確證試驗。
培養特性檢查：接種卵黃瓊脂平板，分成2份，分別在35℃的需氧和厭氧條件下培養48h，觀察生長情況及菌落形態。肉毒梭菌隻有在厭氧條件下才能在卵黃瓊脂平板上生長並形成具有上述特征的菌落，而在需氧條件下則不生長。
注：
為檢出蜂蜜中存在的肉毒梭菌，蜂蜜檢樣需預溫37℃(流質蜂蜜)，或52～53℃(晶質蜂蜜)，充分攪拌後立即稱取20g，溶於100mL滅菌蒸餾水(37℃或52～53℃)，攪拌稀釋，以8000～10000r/min離心30min(20℃)，沉澱，加滅菌蒸餾水1mL，充分搖勻，等分各半，接種庖肉培養基(8～10mL)各1支，分別在30℃及37℃下厭氧培養7天，按6.2進行肉毒毒素檢測。
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