將增菌液和經過堿處理的增菌液分別接種CIN-I培養基和改良Y培養基,於26℃±1℃培 養48h，小腸結腸炎耶爾森氏菌在CIN-I培養基上為紅色牛眼狀菌落,在改良Y培養基上為無色透明、不粘稠的菌落。
改良克氏雙糖試驗
分別挑取上述可疑菌落3—5個，接種改良克氏雙糖斜麵,於26℃±1℃培養24h ,將斜麵和底部皆變黃者做進一步的生化鑒定。
尿素酶試驗和動力觀察
將改良克氏雙糖上的可疑培養物接種到尿素培養基上, 於26±1℃培養後將陽性者接種兩管半固體,分別放置26℃和37℃恒溫培養箱中,培養24h檢查,如在26℃有動力者可進行鏡檢和進一步的生化試驗。
染色鏡檢
將上述可疑菌落做塗片染色,進行顯微鏡觀察,呈革蘭氏陰性球杆菌,有時呈橢圓或杆狀,大小為（0.8μm ~3.0μm）×0.8μm
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