常規培養方法
檢查麥康凱瓊脂平板，誌賀氏菌的菌落為淺粉紅色，半透明，將此可疑菌落接種於下列培養基中：葡萄糖肉湯，TSI 瓊脂斜麵，賴氨酸脫羧酶肉湯，動力試驗瓊脂和胰腖。置35℃培養48h，但應在20h進行檢查，棄去所有有動力、產H2S、產氣、賴氨酸脫羧以及發酵蔗糖與乳糖的培養物。關產生吲哚者，應棄去其44℃增菌物中的陽性培養物。至於42℃增菌培養中的所有可疑培養物皆有可能是陽性或是陰性，因此皆應予保留。
生理學性狀
將初篩反應良好的培養物再接種其他生化試驗，誌賀氏菌的特性概述如下分離：H2S、尿素酶、葡萄糖、（產氣）運動、賴氨酸、脫羧酶、蔗糖、側金盞花醇、乳糖（2日）、KCN、丙二酸鹽、檸檬酸鹽、與水楊素皆為陰性；甲基紅為陽性。用抗血清鑒定其血清型或參照表二所列32個血清型的生物學特性進行試驗。其粘液酸鹽（mucate）和乙酸鹽（acetate）的反應是會有所幫助的。在這些反應中誌賀氏菌一般為陰性，而不產氣的大腸杆菌一般至少在此反應中的一項為陽性。
血清學性狀:
將犢牛肉浸汁瓊脂斜麵的24h培養物混懸於3mL0.85%生理鹽水中,使其濃度相當於標準比濁管第5號,在潔淨的玻璃平皿上用蠟筆標記9個3x1cm的方塊.按照以下方案滴加混懸液，抗血清與生理鹽水。
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