樣品製備
取樣前消毒樣品包裝的開啟處和取樣勺。無菌稱取樣品100g至2L的樣品稀釋瓶中,加人900mL預熱到45 °C的滅菌蒸餾水,或者將樣品直接稱量到裝有9倍預熱到45 ℃的滅菌蒸餾水的樣品 稀釋瓶中,振搖使樣品充分混勻,36℃±1℃培養18 h〜22 h。
選擇性増菌
移取培養18 h〜22 h的懸液1 mL加人10 mL克羅諾杆菌肉湯中,36℃±1℃培養18 h〜22 h。
初篩結果觀察
將培養後的試管置於366 nm波長的UV燈下觀察是否產生熒光,以空白樣品作為對照。如果無 熒光產生,阪崎腸杆菌(克羅諾杆菌屬)為陰性;如果產生熒光,則以下列步驟進行操作。
可疑菌分離
輕輕混勻增菌液,每份增菌液用3 mm接種環(10μL)分別接種2個克羅諾杆菌顯色平板,三區法 或四區法劃線,以得到單個菌落。將平板置36 ℃±1 ℃培養18 h〜22 h。
結果判別
觀察平板上阪崎腸杆菌(克羅諾杆菌屬)的典型形態。在克羅諾杆菌顯色平板上為藍綠色菌落,圓 形,直徑1 mm〜2 mm。
可疑菌產黃色素試驗
從顯色平板上挑取1〜5個可疑菌落分別接種到TSA平板上,25℃±1℃培養48 h〜72 h。
可疑菌生化鑒定實驗
從TSA平板上挑取黃色菌落,革蘭氏染色,做氧化酶試驗。革蘭氏染色陰性,氧化酶試驗陰性,應用生化鑒定試劑或其他細菌鑒定係統進行鑒定。
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