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基因工程的常用工具-載體



錄入時間:2014-6-23 11:15:36 來源:betway必威西汉姆联生物

載體(Vector)是把外源DNA(目的基因)導入宿主細胞,使之傳代、擴增、表達的工具。載體有質粒
(plasmid)、噬菌體、單鏈絲狀噬菌體和粘性末端質粒(粘粒)、病毒等。載體具有能自我複製;有可選擇
的,便於篩選、鑒定的遺傳標記;有供外源DNA插入的位點;本身體積小等特征。
質粒存在於多種細菌,是染色體(核)以外的獨立遺傳因子,由雙鏈環狀DNA組成,幾乎完全裸露,很少有
蛋白質結合。質粒有嚴緊型和鬆弛型之分。嚴緊型由DNA多聚酶Ⅲ複製,一個細胞可複製1-5個質粒。而鬆弛型
由DNA多聚酶Ⅰ複製,一個細胞可複製30-50個質粒,如果用氯黴素可阻止蛋白質合成,使質粒有效利用原料,
複製更多的質粒。質粒經過改造品種繁多,常用的有pBR322、pUC係列等。這些質粒都含有多個基本基因,如
複製起動區(複製原點Ori),便於複製擴增;抗抗生素標記(抗氨芐青黴素Apr、抗四環素Tcr等)或大腸埃
希菌部分乳糖操縱子(E.coli LacZ)等,便於基因重組體的篩選;基因發動子(乳糖操縱子Lac、色氨酸操縱
子Trp等)和轉錄終止序列,便於插入的外源基因轉錄、翻譯表達。質粒上還有許多限製性內切酶的切點,即
基因插入位點,又叫基因重組位點,基因克隆位點。
常用噬菌體載體有單鏈噬菌體M13係統;雙鏈噬菌體係統。噬菌體應和相應的宿主細胞配合使用。以上載體
各有特點,便於選擇,靈活應用。

 

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