采樣應在無菌操作下進行。將蘸有無菌生理鹽水的無菌棉拭子在推子前部上下均勻各塗抹3次，或在使用的刀刃、剪刃的兩側各塗抹一次采樣。將采樣後的棉拭子剪去手接觸部分，放入10mL滅菌生理鹽水中，充分振搖，取5mL放入雙料乳糖膽鹽發酵管中，置36℃±1℃溫箱中培養24h，如乳糖膽鹽發酵管中不產氣，則可報告大腸菌群陰性，如有產酸、產氣者，則進行分離培養。
分離培養：將產酸、產氣的發酵管劃線接種在伊紅美藍瓊脂平板上，置37℃溫箱培養18~24h，觀察菌落形態，做革蘭染色和證實試驗。典型的大腸菌落為黑紫色或紅紫色，具有金屬光澤。
證實試驗：挑取可以大腸杆菌菌落1~2個進行革蘭染色鏡檢，同時接種乳糖發酵管於36℃±1℃培養24h，觀察產氣情況。
結果報告
如乳糖管最終產酸、產氣、革蘭染色為陰性無芽孢杆菌，即可報告大腸菌群陽性
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