接種金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢杆菌的新鮮培養物至營養肉湯培養基中或營養瓊脂培養基上，接種生孢梭菌的新鮮培養物至硫乙醇酸鹽流體培養基中，30℃～35℃培養18 小時～24 小時；接種白色念珠菌的新鮮培養物至改良馬丁培養基中或改良馬丁瓊脂培養基上，23～28℃培養24～48 小時，上述培養物用0.9%無菌氯化鈉溶液製成每1ml 含菌數小於100 cfu （菌落形成單位）的菌懸液。
接種黑曲黴的新鮮培養物至改良馬丁瓊脂斜麵培養基上，23～28℃培養5～7 天，加入3～5ml 含0.05％（v/v）聚山梨酯80 的0.9%無菌氯化鈉溶液，將孢子洗脫。然後，用適宜的方法吸出孢子懸液至無菌試管內，用含0.05％（v/v）聚山梨酯80 的0.9%無菌氯化鈉溶液製成每1ml 含孢子數小於100 cfu 的孢子懸液。
菌懸液在室溫下放置應在2 小時內使用，若保存在2～8℃可在24 小時內使用。
黑曲黴孢子懸液可保存在2～8℃，在驗證過的貯存期內使用。
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