營養瓊脂
盡可能將所有經濾膜過濾後，在36℃±1℃培養了20h～24h，將需驗證的可疑菌落劃線接種營養瓊脂培養基，於36℃±1℃培養20h～24h。檢查再次純化的菌落，並將最初顯紅褐色的菌落進行氧化酶試驗。
氧化酶試驗
取2 滴～3 滴新鮮配製的氧化酶試劑滴到放於平皿裏的潔淨濾紙上。用鉑金絲接種環或玻璃棒，將適量的純種培養物塗布在預備好的濾紙上。在10s 內顯深藍紫色的視為陽性反應。也可以按照商品化氧化酶測試產品的說明書進行該項測試。
金氏B（King′s B）培養基
將上述呈紅褐色的且氧化酶反應呈陽性的培養物接種於金氏B 培養基上，於36℃±1℃恒溫箱培養1d～5d。每天需取出在紫外燈下檢查其是否產生熒光性，將5d 內產生熒光的菌落記錄為陽性。
乙酰胺肉湯
將5.4.1 中的純培養物接種到裝有乙酰胺肉湯的試管中，在36℃±1℃培養20h～24h。然後向每支試管培養物加入1 滴～2 滴鈉氏試劑，檢查各試管的產氨情況，如表現出從深黃色到磚紅色的顏色變化，則為陽性結果，否則為陰性。
計數
將產生綠膿色（藍色/綠色）或氧化酶反應呈陽性，在紫外燈下產生熒光，且在乙酰胺肉湯中產氨的所有菌落證實為銅綠假單胞菌，並進行計數。
通過計數培養後的濾膜上的菌落以獲得銅綠假單胞菌的數量。其他產生熒光或者呈紅棕色的菌落需要進一步驗證。
注：最初濾膜上顯熒光的菌落經氧化酶反應均呈陽性，因此不需在這個測試中計數
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