平板計數
選取2個~3個適宜的連續稀釋度,每個稀釋度接種2個無菌平皿,每皿1 mL。同時,分別吸取1 mL空白稀釋液加入兩個無菌平皿內作空白對照。
及時將15 mL~20 mL冷至46 ℃的結晶紫中性紅膽鹽瓊脂(VRBA)傾注於每個平皿中。小心旋轉平皿,將培養基與樣液充分混勻,待瓊脂凝固後,再加3mL~4 mLVRBA覆蓋平板表層。翻轉平板,置於36 ℃±1 ℃培養18 h~24 h。
平板菌落數的選擇
檢樣
25 g(mL)樣品+225 mL 稀釋液,均質10 倍係列稀釋選擇2 個~3 個適宜稀釋度的樣品勻液,接種VRBA 平板選取菌落數在15 CFU~150 CFU之間的平板,分別計數平板上出現的典型和可疑大腸菌群菌落。典型菌落為紫紅色,菌落周圍有紅色的膽鹽沉澱環,菌落直徑為0.5 mm或更大。
證實試驗
從VRBA平板上挑取10個不同類型的典型和可疑菌落,分別移種於BGLB肉湯管內,36 ℃±1 ℃培養24 h~48 h,觀察產氣情況。凡BGLB肉湯管產氣,即可報告為大腸菌群陽性。
大腸菌群平板計數的報告
經最後證實為大腸菌群陽性的試管比例乘以9.3中計數的平板菌落數,再乘以稀釋倍數,即為每g(mL)樣品中大腸菌群數。例:10-4樣品稀釋液1 mL,在VRBA平板上有100個典型和可疑菌落,挑取其中10個接種BGLB肉湯管,證實有6個陽性管,則該樣品的大腸菌群數為:100×6/10×104/g(mL)=6.0×105 CFU/g(mL)。
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