β-半乳糖苷酶試驗

β-半乳糖苷酶試驗

液體法（ONPG法）

成分

鄰硝基苯β-D-半乳糖苷(ONPG) 60.0 mg

0.01mol/L 磷酸鈉緩衝液(pH7.5) 10.0 mL

1%蛋白腖水(pH7.5) 30.0 mL

製法

將ONPG溶於緩衝液內，加入蛋白腖水，以過濾法除菌，分裝於10mm×75mm 試管內，每管0.5mL，用橡皮塞塞緊。

試驗方法

自瓊脂斜麵挑取培養物一滿環接種，於36 °C1 °C培養1 h~3 h和24 h觀察結果。如果β-D-半乳糖苷酶產生，則於1 h~3 h變黃色，如無此酶則24 h不變色。

平板法（X-Gal法）

成分

蛋白腖 20.0 g

氯化鈉 3.0 g

5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷(X-Gal) 200.0 mg

瓊脂 15.0 g

蒸餾水 1 000.0 mL

pH 7.20.1

製法

將上述各成分加熱煮沸於1L水中，冷卻至25 ℃左右校正pH至7.20.1，115 °C 高壓滅菌10 min。傾注平板避光冷藏備用。

試驗方法

挑取瓊脂斜麵培養物接種於平板，劃線和點種均可，於36 °C1 °C培養18h~24 h觀察結果。如果β-D-半乳糖苷酶產生，則平板上培養物顏色變藍色，如無此酶則培養物為無色或不透明色，培養48 h~72 h後有部分轉為淡粉紅色。

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