樣品處理
冷凍樣品應在45 ℃以下不超過15 min 或在2 ℃~5 ℃不超過18 h 解凍,
若不能及時檢驗,應放於-10℃ ~ -20℃保存;非冷凍而易腐的樣品應盡可能及時檢驗,若不能及時檢驗,應置於2 ℃~5 ℃冰箱保存,24 h 內檢驗。
樣品製備
稱取樣品25 g,放入盛有225 mL PBS 或生理鹽水的無菌均質杯內,用旋轉刀片式均質器以8000 r/min~10000 r/min 均質1 min~2 min,或放入盛有225 mLPBS 或生理鹽水的無菌均質袋中,用拍擊式均質器拍打1 min~2 min。若樣品為液態,吸取25 mL 樣品至盛有225 mL PBS 或生理鹽水的無菌錐形瓶(瓶內可預置適當數量的無菌玻璃珠)中,振蕩混勻,作為1:10 的樣品勻液。
樣品的稀釋
吸取上述1:10 的樣品勻液1 mL 加到裝有9 mL PBS 或生理鹽水的稀釋管中,充分混勻製成1:100 的樣品勻液。據對樣品汙染狀況的估計,按上述操作,依次製成十倍遞增係列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋1 次,換用1 支1mL 無菌吸管或吸頭。
樣品接種
根據對樣品汙染狀況的估計,選擇2 個~3 個適宜稀釋度的樣品勻液(液體樣品可包括原液),以0.3 mL、0.3 mL、0.4 mL 接種量分別入三塊MYP 瓊脂平板,然後用無菌L 棒塗布整個平板,注意不要觸及平板邊緣。使用前,如MYP瓊脂平板表麵有水珠,可放在25 ℃~50 ℃的培養箱裏幹燥,直到平板表麵的水珠消失。
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