基本原理：
將含有定量抗菌藥物的紙片貼在已接種待檢菌的瓊脂平板上，紙片中所含的藥物吸取瓊脂中的水分溶解後會不斷地向紙片周圍區域擴散，形成遞減的濃度梯度，在紙片周圍抑菌濃度範圍內待檢菌的生長被抑製，從而產生透明的抑菌圈。
抑菌圈的大小反映檢測菌對測定藥物的敏感程度，並與該藥對待檢菌的最低抑菌濃度（MIC）呈負相關，即抑菌圈俞大，MIC俞小。
1. 從瓊脂平板挑取形態相似的純培養菌落接種肉湯培養基，並於35度培養至濁度達到或超過0.5麥氏單位，取出用鹽水或肉湯調節菌液濃度至0.5麥氏單位，含菌量約（1－2）×108cfu/ml。也可將菌落直接懸浮於無菌鹽水或肉湯內，調至0.5麥氏單位，這稱為直接菌懸液法。
2. 用無菌棉拭子浸入調好的菌懸液中，將多於菌懸液在管壁擠出，在M-H瓊脂平皿上劃線，劃滿整個瓊脂表麵，旋轉平皿60°重複劃線共三次，最後一次用拭子塗抹瓊脂邊緣。置室溫3－5分鍾。
3.用紙片分配器或無菌鑷子取藥敏紙片，貼於平板表麵，並用鑷尖輕壓一下紙片，使其貼平。每張紙片的間距不小於24mm，紙片的中心距平板的邊緣不小於15mm，90mm直徑的平板適宜貼6張藥敏紙片。
4. 將貼好紙片的平板置35度孵育18－24h後，用遊標卡尺量取抑菌圈直徑。
結果判斷
根據抑菌圈的大小（不同抗生素其抑菌圈大小的標準不一致），判斷為敏感（S），耐藥（R）或中介度（I）。
某些細菌可蔓延生長至某種抗生素的抑菌圈內，如磺胺藥抑菌圈內可能有微量的細菌生長，可忽略不計，應以外圈為準。
M-H瓊脂培養基
根據商品無水M-H瓊脂幹粉要求製備，高壓後平衡溫度至45－50度時傾注平皿，使表麵呈水平，瓊脂厚度為4mm，pH值應在7.2－7.4間，表麵應保持濕潤，但不能有水滴。
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