單染色
將熱固定的塗片放在有水槽的染色架上，用Loeffler亞甲基藍溶液染色5min，輕輕淋 洗玻片，用幹淨的吸紙或濾紙吸幹。
革蘭氏染色
這是一種複染方法，是對多數細菌進行初步鑒定的基本方法。在該方法中，先用結晶 紫對塗片染色用碘液媒染,然後用乙醇、丙酮或乙醇和丙酮的複合液脫色，這一步能脫 掉革蘭氏陰性菌體中的紫色，但卻不能使革蘭氏陽性闡脫色，最後用沙黃染液複染，將革 蘭氏陰性菌染成橘紅色。
用這種染色方法對以將細菌分成兩類：
(1) 革蘭氏陽性菌這類菌不能用乙醇脫色，呈現紫色，如鏈球菌、芽孢菌等。
(2) 革蘭氏陰性歯在顯微鏡下呈現粉色，如假單胞菌、大腸杆菌等。
注意：使用菌齡較短的菌株(18~24h)進行革蘭氏染色或采用包括幼齡菌在內的各 種菌齡的菌株做塗片時，因為一些菌株隨菌齡的變化在革蘭氏染色反應和形態學上會發 生變化：
革蘭氏染色法有很多改進的形式,例如Silverton和Anderson( 1961), Bloows( 1991) 等。使用的試劑和時間取決於實驗室內部常用菌株的特性,伹使用者的偏愛也對方法的 選擇有影響;相對於側重染色操作步驟是否有差異的方法來說，以下介紹的染色方法中 的試劑使用範圍較寬，十分適用於通常的染色。然而，要獲得滿意的染色效果，要嚴格按 照方法的操作步驟進行，尤其在脫色階段。 橾作步驟
(J)將經過18~24h培養的菌株，按常規的方式塗抹一個塗片，並加熱固定；
(2) 用結晶紫染色2mm。注意染色液要覆蓋到所有的塗抹範圍（以下的操作步驟相同)；
(3) 拿住玻片使之成45度角，衝洗掉塗片上所有的結晶紫溶液，然後用碘溶液媒染1min;
(4) 倒掉碘溶液，吸幹，拿住玻片成45度角，用95％的乙醇(或工業甲醇）衝洗玻片，直到不再有紫色溶液從玻片上流下為止(對於薄的塗片來說需要5~15s)；
(5) 用流水淋洗後用1%的沙黃溶液染色15s;
(6) 將玻片充分洗淨吸幹。
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