刃天青的還原反應為兩個階段,首先不可逆的形成試鹵靈,顏色由藍色和紫色變為粉 紅色,然後可逆地從試鹵靈變為無色的二氫雷瑣辛,可用Lovibond比色計(如從Merck獲 得)進行試驗比色。Merck給出了從0(無色)經1(粉紅色)到6(藍色)的一組顏色的變化 對照。
①製備刃天青溶液:將一片標準片劑(Mcrck)加人到50mL冷卻的無菌蒸餾水中, 製成0,005%的刃天青標準溶液。溶液中的刃天青在光照下不穩定,因此不使用時,溶液 應保存在陰涼避光處,最好保存於冰箱,超過8h應棄掉。
②將待測樣品徹底混合,然後加10mL奶於測試管中。
③加入lmL刃天青溶液,將吸管靜置3s後,吹出剩餘液滴,吸管不要接觸奶或濕試 管壁。
④無菌橡皮塞塞住測試管,然後將測試管緩慢倒置2次(4s),將染色劑和奶混勻。
⑤將試管放入(37.5±0.5)℃水浴中記錄試管放入時間。測定大量樣品時,水浴中 的刃天青的測試管不應超過10個。lOmin排斥試驗不應超過5個,水浴時應加 蓋避光。
⑥培養時間取決於試驗的特定要求,到規定時間時,取出並觀察每個試管,完全還原的試管呈現白色,記錄為0;呈現粉白色的試管或白色和粉色摻雜的,記錄為1/2.將其他試管倒置,迅速用比色計比色如下:
在比色計的左邊放置一個沒有染色劑的混合奶空白試管,培養後的試管置於右邊,比色計要有良好的自然光源或標準人造光源。將比色計放在工作台上,從兩個空隙觀察轉動盤,直到與培養試管的顏色相同,記錄轉盤的次數,當顏色居於兩個讀數之間時,記為半值
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