用非選擇性培養基對牛乳、土壤、水和食品等含有混合微生物的樣品進行計數時, 常需要估算平板上生長的不同種類的微生物的相對數量。然後就可以計算出存在於原始樣品中各種微生物的分布百分比。若不加控製地從培養皿中挑選菌落不能獲得代表 性的菌落,現已有多種方法可獲得真正隨機的菌落。在這些操作中,應該注意到那些可 能會被完全忽視但卻十分重要的菌體組成.例如,在107的假單胞菌中有107的氣單胞菌,即在平均100個被檢菌落中僅僅會發現一個氣單胞菌菌落。特定的菌落的選擇 方法取決於所需檢測的菌落數和存在於分離平板上的菌落數目。常用的選擇方法 如下:
方法1
選擇平板上的每一個菌落。這個方法獲得的數量與被檢菌落數目大致相等。
方法2
選擇扇形區段和相對扇形區的每一個菌落。幾種劃分扇區的方法:
1.用油性記號筆在平板的表麵劃分扇區(如分四個區〉。
2.將平板放在哈裏遜板上,標記適當的扇區或菌落。哈裏遜在研究奶酪中的細菌數和細菌類型時設計了哈裏遜板。它能夠很方便地從少量供試的菌落中 獲得有代表性的菌落
將要檢測的培養皿同心地放在板上。首先選擇標記有1的區域中的所有菌落進行檢測。如果得不到足夠的數目,選擇標記有“2”的區域的所有菌落。如果有必要可以繼續 選擇“3”、“4”區域中的菌落,直到達到所需的菌落數。一旦開始對標記了序號的扇區開始計數,必須把這些扇區全部記完。所有在標記線上的菌落可忽略不記。
方法3:複製平板
如果平板表麵已接種,可以用複製工具轉移所有的菌落。最簡單的複製工具是無菌棉絨墊。它是在一個直徑比平皿略小的合適的圓柱體(如合金圓柱體)一端的平麵上平放一張火菌的棉絨墊(高壓後快速臧少壓力以保 證平絨墊的幹燥)而製成。將其輕輕壓在培養基表麵,壓住菌落,取出後連續輕輕壓在幾個準備好的滅菌的適當培養基上,最後壓在對照培養基上檢查轉移是否成功。通常需要 轉移9個平板加1個對照。釆用這種方法可以問時檢測每一個菌落的多種生理特性。如 果要重新使用用過的平絨布,應將其放到一個裝水的容器中。高II消毒,清除汙染,再經洗滌、漂洗、幹燥、梳理後迸行高壓滅菌。
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