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李氏杆菌屬的檢測程序



錄入時間:2013-11-13 9:12:00 來源:betway必威西汉姆联生物

---⑴ 增菌 
 目前常用的單核增生李斯特氏菌檢測增菌肉湯主要有半量Fraser肉湯、 Fraser肉湯(FB)、UVM(Modified University of Vermont broth,也叫UVM1)、LEB(Listeria enrichment broth)和BLEB(buffered Listeria enrichment broth)  
半量Fraser肉湯和Fraser肉湯 • 具有選擇性和區別性。 • 加入檸檬酸鐵銨和七葉苷,起到區別的作用。李斯特氏菌可以水解七葉苷,與培養基中的鐵離子反應,使培養基變黑,可直觀的從培養液的顏色就可以判斷是否有單核李斯特氏菌的生長。 
• 氯化鋰、吖啶黃和萘啶酮酸作為選擇性因子。 
• 半量Fraser肉湯與Fraser肉湯所用的添加劑一樣 

 

 


• 
半量Fraser肉湯:萘啶酮酸10mg/L,吖啶黃12.5mg/L;Fraser肉湯:萘啶酮酸20mg/L,吖啶黃的25mg/L  UVM 
• UVM隻有選擇性沒有區別性 
• 加入萘啶酮酸和鹽酸吖啶黃,作為選擇性因子。雖然其中含有七葉苷,但是沒有添加檸檬酸鐵銨,不能發生黑色的顏色反應。 LEB和BLEB 
• 隻有選擇性沒有區別性 
• LEB是在TSB-YE的基礎上加入鹽酸吖啶黃、萘啶酮酸和放線菌酮等選擇性因子;加入的丙酮酸鈉,有助於受損細胞的恢複;不含七葉苷和檸檬酸鐵銨,無顏色反應。 
• BLEB是在LEB基礎上加入緩衝體係:磷酸二氫鉀和磷酸氫二鈉 檢測程序---⑵分離 
• 分離培養基有:OXA、PALCOM、LPM、MOX等,但首選仍然是OXA。分離原理主要是基於李斯特氏菌具有β-D-葡萄糖苷酶的活性,能水解培養基中的七葉苷,產生七葉素,與鐵離子產生顏色反應而,使菌落為棕褐色,並帶有褐色暈圈,而致病性和非致病性李斯特氏菌病都能發生這種反應 • 還有一些選擇性顯色培養基,如BCM、ALOA、CHROMagar listeria、Rapid’L. mono等,其原理主要是檢測由毒力基因編碼的溶血素,而此種溶血素隻存在於單核增生李斯特氏菌和伊氏李斯特氏菌中,因而可以很好的將此兩種菌同李斯特屬的其他種分開。 檢測程序---⑶鑒定 
藍色菌落檢驗(Henry illumination) 典型運動:相差顯微鏡,輕微旋轉或翻跟頭 動力試驗:7天,傘形生長 過氧化氫酶試驗:陽性 革蘭氏染色:陽性短杆菌 溶血試驗:穿刺接種血平板 硝酸鹽還原試驗:5天,陰性 
糖發酵試驗:葡萄糖、麥芽糖和七葉苷,李斯特菌屬反應均為陽性,除格氏李斯特甘露醇陰性,李斯特其他種甘露醇陰性,木糖和鼠李糖最有檢測意義。 目前單核細胞增生李斯特菌檢驗多采用國標法(GB/T4789.30)。 

 

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