革蘭氏染色法是1884年由丹麥病理學家C.Gram所創立的。革蘭氏染色法可將所有的細菌區分為革蘭氏陽性菌(G+)和革蘭氏陰性菌(G—)兩大類,是細菌學上最常用的鑒別染色法。
該染色法所以能將細菌分為G+菌和G—菌,是由這兩類菌的細胞壁結構和成分的不同所決定的。G—菌的細胞壁中含有較多易被乙醇溶解的類脂質,而且肽聚糖層較薄、交聯度低,故用乙醇或丙酮脫色時溶解了類脂質,增加了細胞壁的通透性,使初染的結晶紫和碘的複合物易於滲出,結果細菌就被脫色,再經蕃紅複染後就成紅色。G+菌細胞壁中肽聚糖層厚且交聯度高,類脂質含量少,經脫色劑處理後反而使肽聚糖層的孔徑縮小,通透性降低,因此細菌仍保留初染時的顏色
步驟:
(1)塗片:塗片方法與簡單染色塗片相同。
(2)晾幹:與簡單染色法相同。
(3)固定,與簡單染色法相同
(4)結晶紫色染色:將玻片置於廢液缸玻片擱架上,加適量(以蓋滿細菌塗麵)的結晶紫染色液染色1分鍾。
(5)水洗:傾去染色液,用水小心地衝洗。
(6)媒染:滴加盧哥氏碘液,媒染1min。
(7)水洗:用水洗去碘液。
(8)脫色:將玻片傾斜,連續滴加95%乙醇脫色20—25s至流出液無色,立即水洗。
(9)複染:滴加蕃紅複染5min。
(10)水洗:用水洗去塗片上的蕃紅染色液。
(11)晾幹:將染好的塗片放空氣中晾幹或者用吸水紙吸幹。
(12)鏡檢:鏡檢時先用低倍,再用高倍,最後用油鏡觀察,並判斷菌體的革蘭氏染色反應性。
(13)實驗完畢後的處理:
①將浸過油的鏡頭按下述方法擦拭幹淨,a.先用擦鏡紙將油鏡頭上的油擦去。b.用擦鏡紙沾少許二甲苯將鏡頭擦2—3次。c.再用幹淨的擦鏡紙將鏡頭擦2—3次。注意擦鏡頭時向一個方向擦拭。
②看後的染色玻片用廢紙將香柏油擦幹
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