用塗抹棒，海綿或者其他采樣設備收集環境樣本。
將收集的樣本添加10毫升滅菌的緩衝蛋白腖水，將樣本與緩衝蛋白腖混合1分鍾，將樣品置於室溫（20-30℃）1小時，最久不超過1.5小時，以修複損傷的李斯特菌。
將測試片放在平坦處，掀起上層膜。
用移液器垂直滴加3毫升樣品到下層膜中央，將上層膜緩慢蓋下，以免產生氣泡。
輕輕將塑料壓板放在位於接種區上層膜上，不要壓，扭轉或者滑動壓板。提起壓板等至少十分鍾，以使膠體凝固。
將測試片透明麵朝上，可疊放至十片，在37℃±1℃培養26-30小時，可以用標準菌落記數器或者其他光學放大器判讀，不要記數圓形輪廓上的菌落，因為他們不受選擇性培養基的影響。
對於定性檢測，根據紫紅色菌落是否存在，結果記為檢出或者未檢出。
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