青黴素發酵工藝控製要點

（1）種子質量的控製  絲狀菌的生產種子是由保藏在低溫的冷凍安瓿管經甘油、葡萄糖、蛋白腖斜麵移植到小米固體上，25 °C 培養 7 天, 真空幹燥並以這種形式保存備用。生產時它按一定的接種量移種到含有葡萄糖、玉米漿、尿素為主的種子罐內 ,26 °C 培養 56h 左右, 菌絲濃度達6%-8%, 菌絲形態正常, 按 10%-15%的接種量移人含有花生餅粉、葡萄糖為主的二級種子罐內,27°C 培養 24h, 菌絲體積 10%-12%, 形態正常, 效價在700D/ml左右便可作為發酵種子。
球狀菌的生產種子是由冷凍管子孢子經混有O. 5% -1. 0 %玉米漿的三角瓶培養原始親米孢子, 然後再移人羅氏瓶培養生產大米抱子 (又稱生產米), 親米和生產米均為25 °C靜置培養, 需經常觀察生長發育情況在培養到 3-4 天, 大米表麵長出明顯小集落時要振搖均勻, 使菌絲在大米表麵能均勻生長, 待10 天左右形成綠色孢子即可收獲。親米成熟接人生產米後也要經過激烈振蕩才可放置恒溫培養, 生產米的孢子量要求每粒米300萬隻以上。親米、生產米子孢子都需保存在 5 °C冰箱內。
工藝要求將新鮮的生產米 (指收獲後的孢瓶在10天以內使用) 接人含有花生餅粉、玉米胚芽粉、葡萄糖、飴糖為主的種子罐內,28 °C 培養 50-60h當pH 值由6. 0-6. 5 下降至 5.5-5. 0, 菌絲呈菊花團狀,平均直徑在 100- 130μm, 每毫升的球數為 6萬 -8萬隻, 沉降率在 85% 以上, 即可根據發酵罐球數控製在 8000-11000隻/ml 範圍的要求, 計算移種體積, 然後接入發酵罐, 多餘的種子液棄去。球狀菌以新鮮孢子為佳, 其生產水平優於真空幹燥的孢子，能使青黴素發酵單位的罐批差異減少。
（2）培養基成分的控製中國植物提取物論壇;h!i8?+T*B
    a. 碳源  產黃青黴菌可利用的碳源有乳糖、蕉糖、葡萄糖等。目前生產上普遍采用的是澱粉水解糖、糖化液 (DE 值 50% 以上) 進行流加。植提之家,植提空間,中國植提論壇,植提論壇,植提網

    b. 氮源  氮源常選用玉米漿、精製棉籽餅粉、麩皮，並補加無機氮源（硫酸氨、氨水或尿素）。
c. 前體  生物合成含有苄基基團的青黴素 G, 需在發酵液中加人前體。前體可用苯乙酸、苯乙酰胺, 一次加入量不大於0.1%, 並采用多次加入, 以防止前體對青黴素的毒害。
d. 無機鹽加人的無機鹽包括硫、磷、鈣、鎂、鉀等, 且用量要適度。另外, 由於鐵離子對青黴菌有毒害作用, 必須嚴格控製鐵離子的濃度, 一般控製在30 μg/ml 。

（3）發酵培養的控製

a. 加糖控製  加糖量的控製是根據殘糖量及發酵過程中的 pH 值確定 , 最好是根據排氣中CO2 量及 O2 量來控製, 一般在殘糖降至 0.6% 左右, pH 值上升時開始加糖。
b. 補氮及加前體  補氮是指加硫酸銨、氨水或尿素, 使發酵液氨氮控製在 O. 01%-0.05%,補前體以使發酵液中殘存苯乙酰胺濃度為 0.05%-0.08% 。
c. pH 值控製  對pH 值的要求視不同菌種而異, 一般為 pH 6.4-6.8, 可以補加葡萄        糖來控製。目前一般采用加酸或加堿控製pH值。
d. 溫度控製  前期 2 5- 2 6 °C, 後期 23 °C, 以減少後期發酵液中青黴素的降解破壞。
e. 溶解氧的控製  一般要求發酵中溶解氧量不低於飽和溶解氧的30% 。通風比一般為1 : 0. 8L/(L • min), 攪拌轉速在發酵各階段應根據需要而調整。

f. 泡沫的控製  在發酵過程中產生大量泡沫, 可以用天然油脂, 如豆油、玉米油等或用化學合成消泡劑 " 泡敵 " 來消泡, 應當控製其用量並要少量多次加入, 尤其在發酵前期不宜多用, 否則會影響菌體的呼吸代謝。
g. 發酵液質量控製  生產上按規定時間從發酵罐中取樣 , 用顯微鏡觀察菌絲形態變化來控製發酵。生產上慣稱" 鏡檢 ",根據" 鏡檢 "中菌絲形變化和代謝變化的其他指標調節發酵溫度, 通過追加糖或補加前體等各種措施來延長發酵時間, 以獲得最多青黴素。當菌絲中空泡擴大、增多及延伸, 並出現個別自溶細胞, 這表示菌絲趨向衰老, 青黴素分泌逐漸停止, 菌絲形態上即將進入自溶期, 在此時期由於茵絲自溶, 遊離氨釋放, pH 值上升, 導致青黴素產量下降, 使色素、溶解和膠狀雜質增多, 並使發酵液變蒙古稠, 增加下一步提純時過濾的困難。因此, 生產上根據" 鏡檢 "判斷, 在自溶期即將來臨之際, 迅速停止發酵, 立刻放罐, 將發酵液迅速送往提煉工段