常用生化試劑作用
錄入時間:2013-9-13 9:46:29
來源：食品夥伴網
1.蛋白酶K：能水解消化蛋白質，特別是與DNA結合的組蛋白。再尿素和SDS中穩定。一般工作濃度是50—100μg/ml，推薦反應緩衝液：50mM Tris-HCl (pH7.5),10mM CaCl2。2.SDS:十二烷基硫酸鈉. 溶解細胞膜上的脂類與蛋白質，因而溶解膜蛋白而破壞細胞膜，並解離細胞中的核蛋白，SDS 還能與蛋白質結合而沉澱3.IPTG 異丙基-β-D-硫代半乳糖苷, 常用於藍白斑篩選及IPTG誘導的細菌內的蛋白表達等. IPTG和乳糖的結構相似，所以它和乳糖一樣，可以與乳糖操縱元的阻遏蛋白結合，使阻遏蛋白的空間構像變化，四聚體解聚成單體，失去與操縱子特異性結合的能力，從而解除了阻遏蛋白的作用，使其後的基因得以轉錄合成利用乳糖的酶類。與乳糖不同的是，IPTG不被 β-半乳糖苷酶水解。常與X-GAL一起用於藍白斑篩選。作用極強的誘導劑,不被細菌代謝而十分穩定4.X-gal5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷，是IPTG的顯色試劑，在IPTG的催化下顯藍色。常跟IPTG一起用與藍白斑篩選。5.G418: 一種抗生素，對幾乎所有的細胞都有毒性，是穩定轉染最常用的選擇試劑。當neo基因被整合進真核細胞基因組合適的地方後 ,則能啟動neo基因編碼的序列轉錄為mRNA,從而獲得抗性產物氨基糖苷磷酸轉移酶的高效表達 ,使細胞獲得抗性而能在含有Ｇ418的選擇性培養基中生長。Ｇ418的這一選擇特性 ,已在基因轉移、基因敲除、抗性篩選以及轉基因動物等方麵得以廣泛應用。6.DMSO 二甲基亞碸.實驗室常用於作液體層析溶劑，同時用作測試物質紫外消光值上時用作參照物.能溶於所有烷烴和烯烴。7.曲拉通X-100TritonX-100.用的細胞裂解液成分之一，在保護蛋白活性方麵有一定作用. 能力介於NP40和SDS之間，偏向於NP408.NP-40 很溫和的去垢劑，1%濃度的基本可以破壞掉胞膜，而對核膜破壞的作用弱，結合特定的buffer可以獲得胞漿蛋白。9、BSA牛血清白蛋白. 主要起維持滲透壓作用、PH緩衝作用、載體作用和營養作用。在動物細胞無血清培養中，添加白蛋白可起到生理和機械保護作用和載體作用。常用於蛋白定量中的內參和抗體稀釋液。10.甲酰胺 甲酰胺被用作凝膠電泳中RNA的穩定劑，也用於穩定毛細管電泳中的變性單股DNA。 11.TEMED 四甲基乙二胺。促凝劑。在中性及堿性pH條件下，加入TEMED可加速凝膠聚合12.巰基乙醇 一種強還原劑。可還原蛋白二硫鍵，從而使蛋白保持溶解狀態，有利於與SDS的結合。使蛋白解離成單個亞基。13.甲叉雙丙烯酰胺N，N'-甲叉雙丙烯酰胺，別名MBA，又叫亞甲基雙丙烯酰胺，次甲基雙丙烯酰胺，N，N'-甲撐雙丙烯酰胺。作交聯劑與丙烯酰胺聚合而製備聚丙烯酰胺凝膠。14.過硫酸銨 過硫酸銨（APS）的作用主要是提供自由基，然後在促凝劑TEMED的作用下使丙烯酰胺及甲叉丙烯酰胺聚合。15.B27 一種添加劑，用於神經肝細胞培養，被認為具有抑製膠質細胞生長的作用。16.DTT 二硫蘇糖醇，常用還原劑，既有抗氧化作用。它能保護酶分子上的還原性基團，維持還原性環境，穩定酶的活性。又是一種蛋白質變性劑，破壞二硫鍵，濃度不同，起到的作用也不同。17.弗氏不完全佐劑和弗氏完全佐劑 弗氏完全佐劑是一種油包水的乳濁液，含結核分枝杆菌的細胞壁成分。佐劑活性來自於油滴中免疫原的持續釋放，並刺激局部免疫反應。弗氏不完全佐劑用於初次免疫刺激。為了減少副作用，不含結核分枝杆菌成分的弗氏不完全佐劑用於加強免 氏完全佐劑是一種油包水的乳濁液，能夠非常有效的誘導產生高滴度的抗體。弗氏完全佐劑含結核分枝杆菌的細胞壁成分，可以加強對抗原的抗體反應。佐劑活性來自於油滴中免疫原的持續釋放，並刺激局部免疫反應。18.吐溫 20Tween-20 ，常用的非離子去垢劑。19.吐溫 80Tweenum 80 ，除作乳化劑外，也用作某些水中難溶藥物的增溶劑。20. 十二烷基肌氨酸鈉 脫細胞試劑，製備脫細胞組織工程支架材料21.PVPPPVPP對片劑具有崩解作用，能和各種不溶於水的藥物共容，能穩定化各種懸浮劑，又具有形成絡合物的能力以及吸附作用等，因而可用作醫藥助劑。也用於除去啤酒中的多酚。22.PIPES呱嗪-N，N'-二(2-乙磺酸）,實驗室做緩衝劑用。全名是呱嗪-N,N-二(2-乙磺酸)，pKa是6.80。不參與也不幹擾生物化學反應，價格比較貴。常用在免疫和細胞類的實驗中，PIPES有時還被用來製備大腸杆菌感受態。23.CTAB 十六烷基三乙基溴化銨，一種去汙劑，可溶解細胞膜，它能與核酸形成複合物，在高鹽溶液中（（0.7 mol/L NaCl）是可溶的，當降低溶液鹽濃度到一定程度（0.3 mol/L NaCl）時，從溶液中沉澱，通過離心就可將CTAB-核酸的複合物與蛋白，多糖類物質分開。最後通過乙醇或異丙醇沉澱DNA，而CTAB溶於乙醇或異丙醇而除去。CTAB法是現在實驗室最常用的一種提取核酸的手段。24。HEPES 羥乙基呱秦乙硫磺酸,一種弱酸緩衝劑，主要作用是防止培養基pH迅速變化。在開放式培養條件下，培養基脫離了5%CO2的環境，CO2氣體迅速逸出，pH迅速升高，若加了HEPES，此時可以維持pH7.0左右。一般在進行克隆化培養時要添加HEPES25．MOPS 一種緩衝液，有抑製RNA酶的作用，一般和甲醛（用於變形RNA）用於RNA變性電泳26。鹽酸胍 鹽酸胍等可使蛋白質結構中的氫鍵發生斷裂，這增加了非極性分子包括氨基酸側鏈的溶解度，減少了疏水相互作用。27。PMSFPhenylmethanesulfonyl fluoride，中文名為苯甲基磺酰氟。用於抑製蛋白酶. PMSF嚴重損害呼吸道粘膜、眼睛及皮膚，吸入、吞進或通過皮膚吸收後有致命危險。一旦眼睛或皮膚接觸了PMSF，應立即用大量水衝洗之。凡被PMSF汙染的衣物應予丟棄。PMSF在水溶液中不穩定。應在使用前從貯存液中現用現加於裂解緩衝液中。PMSF在水溶液中的活性喪失速率隨pH值的升高而加快，且25℃的失活速率高於4℃。pH值為8.0時，20μmmol/l PMSF水溶液的半壽期大約為85min，這表明將PMSF溶液調節 為堿性（pH>8.6）並在室溫放置數小時後，可安全地予以丟棄。 28．溴酚藍pH指示劑，pH=3.0時呈黃色，pH=4.6時呈藍紫色。酸堿指示劑；非水滴定用指示劑，蛋白電泳染色；病毒化驗等。29。台盼蘭台盼藍（Trypan Blue)或稱台盼蘭，是細胞活性染料，常用於檢測細胞膜的完整性30。二甲苯青FF用於瓊脂糖聚丙烯酰胺凝膠電泳的示蹤染料, 易溶於水和醇，可與溴芬藍按照一定比例配置loading buffer31。吖啶橙是一種熒光色素，與細胞中DNA和RNA結合量存在差別，可發出不同顏色的熒光，與DNA結合量少發綠色熒光，與RNA結合量多發桔黃色或桔紅色熒光。該染料具有膜通透性，能透過細胞膜，使核DNA和RNA染色。在熒光顯微鏡下觀察，吖啶橙可透過正常細胞膜，使細胞核呈綠色或黃綠色均勻熒光；而在凋亡細胞中，因染色質固縮或斷裂為大小不等的片斷，形成凋亡小體。吖啶橙使其染上致密濃染的黃綠色熒光，或黃綠色碎片顆粒；而壞死細胞黃熒光減弱甚至消失。吖啶橙AO常與溴化乙啶EB合用雙染，因EB隻染死細胞使之產生桔黃色熒光，由此可區分出正常細胞、凋亡細胞及壞死細胞.它還可以用作移碼突變的誘變劑,能鑲嵌於兩個相鄰的堿基對之間，這樣在DNA複製過程中，會使DNA鏈增加或缺失一個堿基，造成移碼突變。吖啶橙染液有毒，操作時要戴手套，需避光。32。EDTA和EGTAEDTA--乙二胺四乙酸EDTA是螯合劑的代表性物質。能和堿金屬、稀土元素和過渡金屬等形成穩定的水溶性絡合物。此外EDTA也可用來使有害放射性金屬從人體中迅速排泄起到解毒作用。也是水的處理劑。EGTA--乙二醇雙(2-氨基乙基)四乙酸在.Mg2+存在下測定Ca2+時,可用EGTA直接滴定,滴定誤差小於0.3% ,比用EDTA滴定提高了選擇性..此外它與金屬離子形成的配合物的穩定性普遍比相應的EDTA配合物差。33.TRICINEN-[三（羥甲基）甲基]甘氨酸, 常見的電泳係統是Tris－甘氨酸係統；Tris－Tricine電泳則用於分子量小於10kDa的多肽和蛋白的電泳,能夠獲得較好的分離效果. 可以用前者代替。34、PVP40PVP40 中的CO - N = 有很強的結合酚類化合物的能力, 與其形成穩定的複合物, 常用於提取RNA時除去酚類。35、脫氧膽酸鈉離子型去垢劑，作用有：1、裂解細胞；2、溶解蛋白，尤其是可以溶解一些難溶於水的蛋白，如膜蛋白等；3、很適合做WB，但在Co-IP中使用，需要謹慎36、6-BA細胞培養中用到，細胞分裂素。37、碘代乙酰胺也叫作碘乙酰胺,2-碘乙酰胺. 用於有機合成，在蛋白組學中組氨酸和半胱氨酸的烷基化試劑，用於多肽測序以及酶抑製劑等，蛋白組學級試劑38、萘乙酸NAA,為廣譜性植物生長調節劑,可促進細胞分裂,誘導形成不定根,改變雌雄花比例,增加坐果率等39、番紅O藏紅T；氧化還原指示劑；生物染色；酸堿指示劑；滴定分析亞硝酸鹽。40、TTC2，3，5-三苯基氯化四氮唑(紅四氮唑),多用於藥物分析和瓊脂糖添加劑，在計數瓊脂中加入適量的TTC(0.5% TTC 1ML加到100ML瓊脂中)，細菌菌落長成紅顏色,，對去除食品本底顆粒物幹擾非常有意義。
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