將含有定量抗菌藥物的紙片（藥敏紙片）貼在已接種待測菌的瓊脂平板表麵特定部位，該點稱為抗菌藥源。藥物借其分子的擴散力向周圍瓊脂擴散，形成了隨著與藥源距離加大，瓊脂中藥物濃度逐漸減少的梯度濃度醫學`教育網搜集整理。其藥源周圍一定區域的瓊脂內藥物濃度高於抑製該待測菌所需濃度時，則該區域內細菌不能生長，形成透明抑菌圈。抑菌圈的大小可以反映待測菌對該測定藥物的敏感程度，並與該藥對待測菌的最低抑菌濃度（MIC）呈負相關，即抑菌圈愈大，MIC愈小。
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