固相萃取(SPE)方法
1 固相萃取(SPE)柱的選擇:
三聚氰胺呈弱堿性(弱陽離子化合物),淨化過程一般選擇陽離子交換柱。混合型的陽離子交換柱(PCX)通過將磺酸基團鍵合在極性高聚物苯乙烯/二乙烯苯(PEP)吸附劑上,具有陽離子和反相兩種吸附機理,並具有以下優點:
1) 可通過兩種不同溶液的洗滌(水/一定PH值的緩衝溶液和有機溶劑),使樣品更幹淨,提高檢測的靈敏度。
2) 批次重複性好。
3) 回收率高,重現性好,即使小柱跑幹也可以得到較高回收率。
2 樣品錢處理步驟:
2.1 標準樣品配製:
取50mg三聚氰胺標準品,以20%甲醇溶解定容至50ml得到1000ppm的標準溶液,使用時,以提取液(1%三氯乙酸)稀釋至所要的濃度。
2.2 提取:
稱取飼料/奶粉樣品5g(或牛奶10ml),加入50ml 1%三氯乙酸提取液,充分混勻,加入2ml 2%乙酸鉛溶液,超聲20min。然後取部分溶液轉移至10ml離心管中,8000rpm/min 離心10min,取上清液3ml過混合型陽離子交換小柱(PCX)。
2.3 淨化(PCX小柱,60mg/3ml):
1)活化及平衡:3ml甲醇,3ml水
2)上樣:加入提取液3ml
3)淋洗:3ml水;3ml甲醇;棄去淋洗液並將小柱抽幹。
4)洗脫:5ml 5%氨化甲醇(v/v)洗脫。(5%氨化甲醇的配製:5ml氨水+95ml甲醇)。
5)濃縮:50攝氏度,氮氣吹幹,20%甲醇/水定容至2ml。
2.4 檢測:
用HPLC-UV 中國農業部頒標準檢測方法分析,測得PCX柱的回收率結果如下:
添加水平(mg/L) 回收率
空白
0.01 116%
0.1 108%
0.5 92%
2 96%
可以看出:用PCX柱淨化樣品,可以得到滿意的回收率。
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