1 主題內容與適用範圍
本標準規定了蠟樣芽胞杆菌的檢驗方法。
本標準適用於食品和食物中毒樣品中蠟樣芽胞杆菌的檢驗。
2 引用標準
GB 4789.2 食品衛生微生物學檢驗 菌落總數測定
GB 4789.28 食品衛生微生物學檢驗 染色法、培養基和試劑
3 設備和材料
3．1 溫箱：36±1℃。
3．2 普能冰箱。
3．3 顯微鏡。
3．4 恒溫水浴 46±1℃。
3．5 天平。
3．6 電爐。
3．7 吸管：1 mL，10 mL。
3．8 載玻片。
3．9 均質器或乳缽。
3．10 L 型塗布棒。
3．11 滅菌刀，剪，鑷子。
3．12 三角瓶：容量 500 mL。
4 培養基和試劑
4．1 肉浸液肉湯培養基：GB 4789.28 中 4.1。
4．2 酪蛋白瓊脂培養基：GB 4789.28 中 4.65。
4．3 動力-硝酸鹽培養基：GB 4789.28 中 4.72。
4．4 緩衝葡萄糖蛋白腖水：GB 4789.28 中 3.4。
4．5 血瓊脂培養基：GB 4789.28 中 4.6。
4．6 3%過氧化氫溶液。
4．7 甲萘胺-乙酸溶液。
4．8 對氨基苯碘酸-乙酸溶液。
4．9 革蘭氏染色液：GB 4789.28 中 2.2。
4．10 甘露醇卵黃多粘菌素（MYP）瓊脂培養基：GB 4789.28 中 4.64。
4．11 0.5%堿性複紅染色液：GB 4789.28 中 2.8。
4．12 木糖-明膠培養基：GB 4789.28 中 4.66。
5 操作步驟
蠟樣芽胞杆檢驗程序下：
6 操作步驟
6．1 菌數測定
以無菌操作將檢樣 25 g（mL） （按 GB 4789.2 測定），用滅菌生理鹽水或磷
酸鹽緩衝液做成 10
-1
～10
-5
的稀釋液。取各稀釋液 0.1 mL，接種在兩個選擇性培
養基——甘露醇卵黃多粘菌素（MYP）瓊脂培養基上，用L 形棒塗布於整個表麵，
置 36±1℃溫箱培養基 12～20 h 後選取適當菌落數的平板進行計數，蠟樣芽胞
杆菌在此培養基上的菌落為粉紅色（表示不發酵甘露醇）周圍有粉紅色的暈（表
示產生卵磷脂酶） 。計算後，從中挑取 5 個此種菌落做證實試驗。根據證實為蠟
樣芽胞杆菌的菌落數計算出該平板上的菌落數， 然後乘其稀釋倍數， 即得每克 （或
毫升）樣品中含蠟樣芽胞杆菌數，例如 MYP 平板的可疑菌落數為 25 個，取 5 個
鑒定，證實為4 個，乘上稀釋倍數（如10
4
） ，再乘上1 g（或mL）檢樣數（取的
是 0.1 mL 樣）則為：
25×4/5×10
4
×10=2×10^6
6．2 分離培養
取檢樣或稀釋液劃線分離培養於選擇性培養基（MYP）上，置37℃培養12～
20 h，挑取可疑的蠟樣芽胞杆菌菌落（見6.1）接種於肉湯和營養瓊脂做成純培
養，然後做證實試驗。
6．3 證實試驗
6．3．1 形態觀察
本菌為革蘭氏陽性大杆菌，寬度在 1μm或1μm以上，芽胞呈卵圓形，不突
出菌體，多位於菌體中央或稍偏於一端。
6．3．2 培養特性
本菌在肉湯中生長混濁，常微有菌膜或壁環，振搖易乳化；在普通瓊脂平板
上生成的菌落不透明、表麵粗糙、似毛玻璃狀或融蠟狀，邊緣不齊。
6．3．3 生化性狀及生化分型
6．3．3．1 生化性狀
本菌有動力；能產生卵磷脂酶和酪蛋白酶；過氧化氫酶試驗陽性；溶血；不
發酵甘露醇和木糖； 常能液化明膠和使硝酸鹽還原； 在厭氧條件下能發酵葡萄糖。
6．3．3．2 生化分型
蠟樣芽胞杆菌可根據對檸檬酸鹽利用、硝酸鹽還原、澱粉水解、V-P反應、
明膠液化性狀的試驗，將該菌分成不同的型別，見表 1。
本菌在生化性狀上與蘇雲菌芽胞杆菌極為相似， 但後者可籍細胞內產生蛋白
質毒素結晶加以鑒別。其檢查方法如下：取營養瓊脂上純培養物少許，加少量蒸
餾水塗於玻片上，待自然幹燥後用弱火焰固定，加甲醇於玻片上，半分鍾後傾去
甲醇，置火焰上幹燥，然後滴加 0.5%堿性複紅液，並用酒精燈加熱至微見蒸氣
維持 1.5 min，移去酒精燈，將玻片放置半分鍾，傾去染液，置潔淨自來水充分
漂洗，晾幹，鏡檢，在油浸鏡下檢查有無遊離芽胞和深染的似菱形的紅色結晶小
體（如未形成遊離芽胞，培養物應放室溫再保存 1～2 d 後再檢查） ，如有即為蘇
雲金芽胞杆菌，蠟樣芽胞杆菌檢查為陰性。
附加說明：
本標準由衛生部衛生監督司提出。
本標準由衛生部食品衛生監督檢驗所負責起草。
本標準主要起草人白竟玉。
本標準由衛生部委托技術歸口單位衛生部食品衛生監督檢驗所負責解釋。
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