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培養基的配製原則



錄入時間:2012-7-27 8:56:25 來源:原創

  
(一)培養基組分應適合微生物的營養特點
即根據不同微生物的營養需要配製不同的培養基。 
         不同營養類型的微生物,其對營養物的需求差異很大。如自養型微生物的培養基完全可以(或應該)由簡單的無機物質組成。異養做生物的培養基至少需要含有一種有機物質,但有機物的種類需適應所培養菌的特點。 
       按微生物的主要類群來說,它們所需要的培養基成分也不同: 
                        細菌:      牛肉膏蛋白腖培養基 
                                          LB  (Luria-Bertani) 
                        放線菌:   高氏一號培養基 
                        真菌:      查氏合成培養基 
                                          PDA (Potato-Dextrose-Agar) 
                            酵母菌;   麥芽汁 
當對試驗菌營養需求特點不清楚的時候,可以采用‘生長譜’法進行測定。 
(二)營養物的濃度與比例應恰當
●濃度過高——微生物的生長起抑製作用, 
  濃度過小——不能滿足微生物生長的需要。 
●碳氮比(C/N)直接影響微生物生長與繁殖及代謝物的形成與積累,故常作為考察培養基組成時的一個重要指標; 
C/N比值= 碳源中的碳原子的mol數/氮源中所含的氮原子的mol數 
例:穀氨酸生產中 
 C/N =4/1時,菌體大量繁殖,穀氨酸積累少; 
C/N=3/1 時,菌體生長受抑製,而穀氨酸大量增加。 
●速效性氮(或碳)源與遲效性氮(或碳)源的比例 
 ●各種金屬離子間的比例 
(三)物理化學條件適宜
(1)pH:      各類微生物的最適生長pH值各不相同: 
                     細    菌:7.0~8.0    放線菌:7.5~8.5 
        酵母菌:3.8~6.0    黴    菌:4.0~5.8 
        在微生物的生長和代謝過程中,由於營養物質的利用和代謝產物的形成與積累,培養基的初始pH值會發生改變,為了維持培養基pH值的相對恒定,通常采用下列兩種方式: 
內源調節:在培養基裏加一些緩衝劑或不溶性的碳酸鹽;調節培養基的碳氮比。 
外源調節:按實際需要不斷向發酵液流加酸或堿液 
☆磷酸緩衝液:pH值從6.0~7.6之間 
☆加入CaCO3: 
☆培養基中所含氨基酸、肽、蛋白質等物質也可起到緩衝作用。 
(2)滲透壓和aw
滲透壓     
        等滲溶液    適宜微生物生長 
        高滲溶液    細胞發生質壁分離 
        低滲溶液    細胞吸水膨脹,直至破裂 
大多數微生物適合在等滲的環境下生長,而有的菌如Staphylococcus aureus則能在3mol/L  NaCl的高滲溶液中生長。能在高鹽環境(2.8~6.2/L  NaCl)生長的微生物常被稱為嗜鹽微生物(Halophiles)。 
(3)氧化還原電勢(redox poyential)
各種微生物對培養基的氧化還原電勢的要求: 
好氧微生物:+0.3~+0.4V,(在>0.1V以上的環境中均能生長).厭氧微生物:隻能在+0.1V以下生長 
兼性厭氧微生物:+0.1V以上呼吸、+0.1V以下發酵 

培養基是多氧化還原偶的複雜電化學係統,測出的Eh值僅代表其綜合結果。 
對微生物影響最大的是:分子氧和分子氫的濃度 
培養基中常用的還原劑:巰基乙酸、抗壞血酸、硫化氫、半胱氨酸、穀胱甘肽、二硫蘇糖醇等。 

 

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