菌種保存培養基

一、菌種保存培養基

   [配法]

    蛋白腖10g，牛肉膏5g，氯化鈉3g，磷酸氫二鈉2g，瓊脂粉4.5g，蒸餾水1L 。  

將上述成分混合於水中，加熱溶解，調pH至7.4~7.6，分裝試管2/3左右高度，121℃高壓滅菌15min，成為半固體培養基，備用。

   [質量控製]

   培養基呈淡黃色半固體狀。大腸埃希菌(ATCC 25922)生長良好,動力陽性；福氏誌賀菌(ATCC 12022)生長良好,動力陰性；金黃色葡萄球菌(ATCC 25923)生長良好,動力陰性。

二、增菌培養基

   1.葡萄糖肉湯

[用途]

用於血液增菌。

   [配法]

    蛋白腖(或月示 腖)10g，氯化鈉5g，肉浸液（或心浸液）1L，葡萄糖3g，枸櫞酸鈉3g，5g/L對氨基苯甲酸水溶液10ml，1mol/L硫酸鎂溶液20ml，青黴素酶1000 U。                                         

    將蛋白腖、氯化鈉混合於肉浸液中加熱溶解，再加入葡萄糖、枸櫞酸鈉、對氨苯甲酸及硫酸鎂，繼續煮沸5min，並補足失水，調整pH至7.8。

過濾分裝，每瓶50ml，高壓滅菌115℃20min後，每瓶加入青黴素酶50 U，經無菌試驗合格後，冷卻備用。

    [用法]

    將采取的血液標本，以無菌手續注入培養瓶中（血液1ml，培養液10ml），置35℃培養箱內，每天1次取出觀察結果。如有細菌生長，可出現數種不同的表現，應隨時作分離培養，可選用血瓊脂、伊紅美藍瓊脂及巧克力瓊脂平板等。無細菌生長表現的培養瓶，需連續觀察7d，仍無細菌生長方可棄去。在觀察的過程中，至少應作兩次分離培養。

⑴ 枸櫞酸鈉為抗凝劑，可使血液加入培養基中不凝固。

    ⑵ 對氨基苯甲酸主要中和血液中磺胺類藥物的抑菌作用。

    ⑶ 硫酸鎂主要抑製血液中存在的四環素、金黴素、新黴素、多粘菌素及鏈黴素的抑菌作用。

⑷ 本培養基近年來有許多改良配方，如加入0.3%～0.5%酵母浸膏以增加營養；加0.2%核酸刺激細菌生長；加0.1%粘液素能被覆於細菌的表麵，保護細菌免受抗體破壞；加入聚茴香腦磺酸鈉（SPS）能中和補體的抗藥作用從而提高檢出率。

   2.血液增菌培養基

   [用途]

    血液和骨髓液病原菌的增菌培養。

   [配法]

    蛋白腖10g，氯化鈉5g，牛肉膏3g，葡萄糖1g，酵母膏粉3g，枸櫞酸鈉3g，磷酸氫二鉀2g，5g/L對氨基苯甲酸溶液5ml，1mol/L硫酸鎂溶液20ml， 4g/L酚紅溶液6ml，青黴素酶50 U，聚茴香腦磺酸鈉(SPS) 0.3g，蒸餾水1L。   

   將上述成分（除酚紅指示劑、青黴素酶外）混合加熱溶解，校正pH至7.4，再加酚紅，過濾分裝每瓶30～50ml，經121℃滅菌15min和35℃24h無菌試驗備用。臨用時每瓶加入1.5～2.5 U青黴素酶。

    傷寒沙門菌ATCC 50096、白色念珠菌ATCC 10231、化膿性鏈球菌ATCC   19615、肺炎鏈球菌ATCC 6305、金黃色葡萄菌ATCC 25923、銅綠假單胞菌ATCC 27853均生長良好。