細菌的生化試驗

　　細菌的生化試驗是將已分離純化的待檢細菌，接種到一係列含有特殊物質和指示劑的鑒別培養基中，觀察該菌在這些培養基內的pH變化，或是否產生某種特殊的代謝產物，現代細菌學已普遍采用微量、快速、自動化等鑒定係統，已有很多相應的配套試劑供種屬鑒定使用，常見的生化試驗有：

　　1.糖（醇、苷）類發酵試驗：各種細菌分解糖（醇、苷）的能力不同，分解後代謝產物不同，可根據其分解產物鑒別細菌。實際應用中，可選擇合適的含有單糖、雙糖、三糖或多糖的培養基，接種待檢菌，經培養後觀察結果。若能分解糖類產酸，培養基中的指示劑呈酸性反應；產氣的細菌則出現氣泡或裂隙。如大腸杆菌能分解乳糖，傷寒杆菌與痢疾杆菌則不能，用此可加以區別。糖發酵試驗是鑒定細菌最常用的生化反應，特別用於腸杆菌科細菌的鑒定。

　　2.甲基紅試驗：細菌分解葡萄糖形成丙酮酸，丙酮酸進一步分解成甲酸、乙酸、乳酸等混合酸，使培養基pH下降至4.4以下，加入甲基紅指示劑變為紅色。若產酸量少或將酸進一步分解為醇、酮、醛等，使培養基pH在5.4以上，甲基紅試驗則呈橘黃色。該試驗簡稱為MR試驗。將待檢菌接種於葡萄糖蛋白腖水培養基內，培養後滴加甲基紅試劑，呈紅色為MR試驗陽性，橘紅色為弱陽性，橘黃色為陰性。該試驗主要用於大腸埃希菌和產氣腸杆菌的鑒別，前者陽性，後者陰性。

　　3.VP試驗：有些細菌能使丙酮酸脫羧生成乙酰甲基甲醇，進而在堿性溶液中被空氣中的氧氧化成雙乙酰，雙乙酰在α-萘酚和肌酸的催化下，生成紅色化合物，為VP試驗陽性。將待檢菌接種於葡萄糖蛋白腖水培養基，培養後按每毫升培養基加入含0.3%肌酸或肌酐的0.1ml40%KOH溶液，48～50℃水浴2h或37℃4h，充分搖動後觀察結果，紅色為VP試驗陽性。

　　4.吲哚試驗：有些細菌含有色氨酸酶，分解培養基中的色氨酸產生吲哚，吲哚與對二甲基氨基苯甲醛作用，形成玫瑰吲哚而呈紅色。該試驗也稱靛基質試驗。將待檢菌接種於蛋白腖水培養基中，培養後沿管壁加入對二甲基氨基苯甲醛試劑0.5ml，使其形成兩層液麵，兩液麵接觸處呈紅色為陽性，無色為陰性。該試驗主要用於腸道杆菌的鑒定。

　　5.硫化氫試驗：有些細菌分解含硫氨基酸生成硫化氫，遇培養基中的醋酸鉛或硫酸亞鐵可形成黑色的硫化鉛或硫化亞鐵沉澱。將待檢菌接種於醋酸鉛培養基中培養，有黑色沉澱者為陽性，無變化者為陰性。H2S試驗常用於腸杆菌科菌屬間的鑒定。

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