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食源性致病菌檢測技術——分子生物學方法鑒定係統



錄入時間:2012-2-27 16:40:58 來源:食品夥伴網

    隨著微生物學、生物化學和分子生物化學的飛速發展,對病原微生物的鑒定己不再局限於對它的外部形態結構及生理特性等一般檢驗上,而是從分子生物學水平上研究生物大分子,特別是核酸結構及其組成部分。在此基礎上建立的眾多檢測技術中,核酸探針和聚合酶鏈反應,以其敏感、特異、簡便、快速的特點成為世人矚目的生物技術革命的新產物,業已逐步應用於食源性病原菌的檢測。分子生物學方法除了可用於初篩檢測,由於其具有高特異性和敏感性,因此可直接用於微生物的鑒定。

核酸探針在快速檢測食品中致病菌的研究現狀  

原理:將己知核苷酸序列DNA片段用同位素或其他方法標記,加入己變性的被檢DNA樣品中,在一定條件下即可與該樣品中有同源序列的DNA區段形成雜交雙鏈,從而達到鑒定樣品中DNA的目的。

核酸探針:能認識到特異性核苷酸序列,且有標記的單鏈DNA分子。

核酸探針的應用主要的範圍:
(1)用於檢測無法培養,不能用作生化鑒定、不可觀察的微生物產物以及缺乏診斷抗原等情況,如腸毒素基因。

(2)用於檢測同食源性感染有關的病毒病,如檢測肝炎病毒,流行病學調查研究,區分有毒和無毒菌株。

(3)檢測細菌內抗藥基因。

(4)分析食品是否會被某些耐藥菌株汙染,判定食品汙染的特性。

(5)細菌分型,包括rRNA分型。 


核酸探針檢測技術的最大優點是:
(1)特異性;
(2)敏感性。

存在的問題:
    檢測一種菌就需要製備一種探針;要達到檢測量還要對樣品進行一定時問的培養;探針檢測是分析基因序列,對毒素汙染的食品有時因樣品中不含產毒菌而無法檢測。

製備核酸探針雜交技術:
(1)夾心雜交法

(2)核酸置換雜交分析法

(3)浸染棒法

 

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