建議用下列方法恢複培養冷凍幹燥保藏的菌種。
-、安瓶管開封
1.用浸過70%酒精的脫脂棉擦淨安瓿管。
2.用火焰將安瓿管頂端加熱。
3.滴無菌水至加熱的安瓿管頂端使玻璃開裂。
4.用挫刀或鑷子敲下已開裂的安瓿管的頂端。
二、菌株恢複培養
1.用無菌吸管,吸取0.3~0.5ml適宜的液體培養基,滴人安瓿管內,輕輕振蕩,使凍於菌體溶解呈懸浮狀。
2.取0.1~0.2ml菌體懸浮液,移植於適宜的瓊脂斜麵/平板培養基上,剩餘的菌液,注入適宜的液體培養基內,然後在建議的溫度下培養。
3.若未能活化,或活化後有疑問時,請於收到菌種1個月內,通知保藏中心,經查證無誤後,即免費補寄。
三、注意事項
1.菌種活化前,請將安瓿管保存在6一10℃的環境下。
2.厭氧菌的培養,如無特別說明,自開封至接種完成,均需以無氧氣體充填,以保持厭氧狀態。
3.某些菌種經過冷凍幹燥保存後,延遲期較長,需連續兩次繼代培養才能正常生長,此時請將步驟二(2)重複一次。
液氮超低溫保藏程序:
1、容器的選擇:使用帶螺旋蓋的2ml塑料安培瓶。
2、檢查安培瓶是否滲漏:用0.05%的亞甲基藍水溶液在4℃浸泡30-45分鍾,衝洗幹淨,棄去含有藍色染料的安培瓶,其餘的安培瓶備用。
3、打印標簽(激光打印)。
4、容器的滅菌:先用蒸餾水漂洗幹淨安培瓶,再用蒸餾水在滅菌鍋中121℃浸泡滅菌15分鍾,幹燥並將打印好的標簽放入安培瓶中,略擰緊螺旋蓋,再行121℃滅菌30分鍾。
5、保藏菌菌齡:處於最大生長量階段或對數生長期後期。
6、保護劑:選用5-10%的甘油或二甲基亞碸作保護劑。
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