花粉培養是指把花粉從花藥中分離出來，以單個花粉粒作為外植體進行離體培養的技術。由於花粉已是單倍體細胞，誘發它經愈傷組織或胚狀體發育成的植株都是單倍體植株。且不受花藥的藥隔、藥壁、花絲等體細胞的幹擾。但缺點是較比花粉培養難度大。
2.1花粉的分離
取新鮮未開的花蕾用自來水衝冼10min，以75%的酒精消毒10～15min，無菌水衝冼2次，再用10%漂白粉上清液浸泡20min，無菌水衝冼3～4次。然後將花藥放到加有基本培養基的小燒杯中，用注射器的內管在燒杯的壁上擠壓花藥，使花粉從花藥中釋放出來。用尼龍篩過濾掉藥壁組濾液再經低速離心（100～160rpm），上麵的碎片可用吸管吸掉，再加入新鮮培養基。連續進行兩次過濾，到每毫升含103～104個花粉的濃度就可以了。
簡單的方法是花粉從花藥中擠出後，用鑷子取出花粉空殼，放在培養基上培養。此法適於微室栽培，但往往有藥壁等體細胞混入。
2.2花粉的預處理
①低溫處理
在花粉第一次有絲分裂期進行低溫處理。②重力的作用
在從花蕾中取出花藥前1小時，在5℃條件下進行低溫離心機離心，可提高單倍體的誘導率。
2.3培養基成分
在花粉培養中可添加一些物質，有促進生長的作用。培養基選用Nitsch作基本培養基，含有諸如硝酸鈣、硫酸、檸檬酸鐵、酵母浸出液和椰子胚乳等。
2.4花粉培養方法
①微室培養法
取含有50～80粒花粉的一滴培養液放在微室培養裝置中，為了防止花粉破裂，應在低倍條件（4℃以下）接種，然後在20℃下培養。
②看護培養法
在裝有50ml液體培養基的小培養皿中，用解剖針撕開花藥釋放出花粉，形成花粉懸浮液，最後稀釋至0.5ml培養基中，含有10個花粉粒的細胞懸浮液。看護培養時，把花藥放在瓊脂培養基表麵上，然後在每個花藥上覆蓋一小塊圓片濾紙。用移液管吸取1滴已準備好的花粉粒懸浮液，滴在每個小圓片濾紙上。培養在25℃和一定光照強度下，大約一個月長出細胞群。由於完整的花藥發育過程釋放出有利於花粉發育的物質，並通過濾紙供給花粉，促進了花粉的發育。
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