概念:是切取莖尖部分或莖尖分生組織部分,進行培養的過程。這是組織培養中用得較多的外植體。因為莖尖分生區是四個分區的主要部分。
莖尖培養可分為微莖尖培養和普通莖尖培養。
1)微莖尖:指帶有1-2個葉原基的生長錐,其長度不超過0.5mm。(圖)
2)普通莖尖:指取幾mm到幾十mm長的頂芽尖及側芽尖。這裏主要介紹後者。
特點:技術簡單,操作方便,易成活和分化,成苗時間短。
步驟如下:
1.取材:挑選潔淨、無汙染,生長不久的莖,從植物的莖、藤或匍匐枝上切取2cm以上的頂梢。木本植物可事先對莖尖噴幾次滅菌藥劑。用於普通莖尖培養。
2.消毒 將采到的莖尖切成0.5~1.0cm長,並將大葉除去,休眠芽預先剝除鱗片。(圖)將莖尖置於流水衝洗幹淨,再在95%的酒精中處理30秒,然後在稀釋20倍的次氯酸鈉中浸5~8分鍾,最後用無菌水衝洗數次,瀝幹後準備接種。
3.接種 為了減少汙染,在接種前再剝掉一些幼葉,使莖尖為0.5cm大小左右。用作快速繁殖。
注意:一要防褐化。接種時,不用鏽刀,動作敏捷,隨切隨接,用1~5%VC液浸泡處理。
二要防幹燥
4.培養
(1)培養基:采用MS培養基或略加修改,或補加其它物質。也可用其它培養基如White,Heller等。
培養基中生長素是必須的,如2,4-D,IAA,NAA等,但是濃度不能太高,一般用0.1mg/L左右,若高易產生畸形芽或形成愈傷組織。
(2)培養問題處理:
莖尖在培養過程中會出現生長太慢、生長太快和生長正常等三種類型。
I生長太慢:接種後莖尖不增大,隻是莖尖逐漸變綠,出現綠色小點,細胞逐漸老化而進入休眠狀態,或者逐漸變褐死亡。引起原因的是生長素濃度太低,或是溫度過低或過高;
II生長太快型:是接種後莖尖迅速增大,在莖尖基部產生愈傷組織,並迅速增殖,而莖尖不伸長,久之莖尖也形成愈傷組織,從而喪失發育成苗的能力。引起原因一是生長素濃度過高,引起細胞瘋狂分裂而導致愈傷組織的形成。二是光照太弱或溫度太高。
III生長正常型是接種後莖尖基部稍增大並形成少量愈傷組織,莖尖顏色逐漸變綠,並逐漸伸長,葉原基發育成可見的小葉,進而形成小苗。
(3)培養條件:培養時每天光照可長一些,最長達16h/d,照度1500-3000Lx,溫度25±2℃。並且根據不同植物種類,或者隨培養過程的不同,給予適當的晝夜溫差等處理。
注意:防培養基幹燥,由於莖尖培養時間較長,通過定期轉移、嚴加封口等。一般莖尖培養在40天左右可直接長成新梢。
(3)繼代培養 用莖段切割法。
繼代培養可用MS0培養基。或用生長物質較低的MS培養基。
也可邊增殖邊生根培養
(4)誘導生根
I) 用1/2 MS培養基, 並隻加入生長素類調節物質,如NAA 、IBA等。注意濃度
II)也可將切下的新梢基部浸入50或100ppm的IBA溶液處理4~8小時,然後轉移到無激素的生根培養基中。
III)注意較高濃度的生長素對生根有抑製作用。
5.移栽馴化
指標:發現新梢基部生有較濃密的不定根,生長健壯而發達,長度在1cm以內。
移栽:可先進行幾天煉苗程,取出---洗培養基--栽入馴化器皿—基質蛭石:珍珠岩:草炭土為1:1:0.5。
栽後管理:1)初期保持濕度。基質澆透水,床麵澆濕,搭小拱棚等,並且初期要常噴霧處理,2)後期逐漸減少濕度。拱棚兩端打開通風,減少噴水次數。以後揭去拱棚,並控製水分。
溫度管理上要掌握適宜的生根溫度,最適宜的溫度是16~20℃,春季地溫較低時,可用電熱線來加溫。
光照:初期弱光照,加蓋遮陽網或報紙等,後期可直接利用自然光照。
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