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組培培養基的選擇



錄入時間:2011-12-23 9:55:38 來源:互聯網

 

 

在建立一個新的實驗體係時,為了能研製出一種適合的培養基,最好先由一種已被廣泛使用的基本培養基(如MS培養基或B5培養基)開始。當通過一係列的實驗,對這種培養基做了某些定性和定量的小變動之後,即有可能得到一種能滿足實驗需要的新培養基,選擇最佳培養基。常用試驗方法主要有單因子試驗、多因子試驗及廣譜實驗等。 

一、單因子試驗 

單因子試驗中,培養基中其它成分都維持在一般水平上,隻變動一個因子,以找出這一因子對試驗的影響和影響的程度,例如MS基本培養基的其它成分和用量都不變,隻變動NAA用量對某一培養物生根的影響,這種隻研究一個因素的試驗就是單因子試驗。 

生物學試驗不同於物理學或化學試驗,最顯著的差別是在生物學試驗中必需設置對照組與試驗組,試驗組可以有一組或幾組,隨試驗的複雜性增加,對照組也可能有一組以上。要求對照組與試驗組中的試驗個體,即植物組織塊或其它培養物,必須在遺傳性、生理狀態、前培養條件等方麵,盡可能完全一致。以保證試驗結果是來源於試驗因子,而不是由於試驗材料不一致導致的。 

試驗中各處理一般都要設有一定的重複,以取得可靠的試驗結果。隨試驗規模和要求不同,大多每個項目要有410瓶,每瓶至少3塊培養物或3叢小幼苗。 

二、多因子試驗 

對培養基中兩個或兩個以上因素進行研究的試驗稱為多因子實驗,試驗可采用完全試驗方案,也可選用正交設計方案,完全試驗方案具有均衡完全的特點,各個因子的每個水平都相互搭配,構成了所有可能的處理組合,如研究NAA6-BA的最佳濃度組合,每個因子各設5個濃度水平(00.52.5510μmol/l),這兩種因子各種濃度的所有組合,就構成了一個具有25項處理的試驗(表33)。 

完全試驗方案試驗因子越多,處理數越多,試驗越複雜,消耗的精力、物力越多。為了減少試驗處理,但又能準確全麵地獲得試驗信息,通常采用正交試驗。例如,采用正交設計,在使用此表時就可以安排4個因子,3種水平的試驗,一共做9種不同搭配的試驗,其結果相當於做了27次種種搭配的試驗。正交試驗雖然是多因素搭配在一起的試驗,但是在試驗結果的分析中,每一種因素所起的作用卻又能夠明白無誤地表現出來。因此一次係統的試驗結果,就可以把問題分析得清清楚楚,用有限的時間取得成倍的收獲。在組織培養研究中,可用於同時探求培養基中適宜的幾種成分的用量,如細胞分裂素、生長素、糖和其它成分的用量。 

三、逐步添加和逐步排除的試驗方法 

在植物組織分化與再生的研究中,在沒有取得可靠的分化與再生之前,往往添加各種有機營養成分,而在取得了穩定的再生之後,就可以逐步減少這些成分。在逐步添加時是使試驗成功,在逐步減少時是縮小範圍,以便找到最有影響力的因子,或是為了實用上的需要竭力使培養基簡化,以降低成本和利於推廣。在尋求最佳激素配比時,也經常用到這種加加減減的簡單方法。 

四、廣譜實驗法

 在廣譜實驗法中,把培養基中所有組分分為4大類:無機鹽、有機營養物質(蔗糖、氨基酸和肌醇等)、生長素、細胞分裂素。對每一類物質選定低(L)、中(M)、和高(H3個濃度。4類物質各3種濃度的自由組合即構成了一項包括81個處理的實驗。在這81個處理中最好的一個可用4個字母表示。例如,一個包含中等濃度無機鹽,低濃度生長素、中等濃度細胞分裂素和高濃度有機營養物質的處理即可表示為MLMH。達到這個階段,再試用不同類型的生長素和細胞分裂素即可找到培養基的最佳配方。這是因為不同類型的生長素和細胞分裂素對不同植物的活性有所不同。

 

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