實驗目的
1. 明確培養基的配製原理。
2. 掌握配製培養基的一般方法和步驟。
實驗內容
學習細菌、放線菌、酵母菌及黴菌四大類微生物培養基的配製。
實驗原理
培養基是人工配製的適合微生物生長繁殖或積累代謝產物的營養基質，用以培養、分離、鑒定、保存各種微生物或積累代謝產物。
各類微生物對營養的要求不盡相同，因而培養基的種類繁多。培養細菌常用牛肉膏蛋白腖培養基，培養放線菌常用高氏 I 號培養基，培養黴菌常用蔡氏培養基或馬鈴薯培養基，培養酵母菌常用麥芽汁培養基或馬鈴薯葡萄糖培養基。另外還有固體、液體、加富、選擇、鑒別等培養基之分。在這些培養基中，就營養物質而言，一般不外乎碳源、氮源、無機鹽、生長因子及水等幾大類。瓊脂隻是固體培養基的支持物，一般不為微生物所利用。它在 96℃以上熔化成液體，而在 45℃左右開始凝固成固體。在配製培養基時，根據各類微生物的特點，就可以配製出適合不同種類微生物生長發育所需要的培養基。
培養基除了滿足微生物所必需營養物質外，還要求有一定的酸堿度和滲透壓。黴菌和酵母菌的pH 偏酸；細菌、放線菌的 pH為微堿性。所以每次配製培養基時，都要將培養基的 pH值調到一定的範圍。
實驗步驟
1．牛肉膏蛋白腖培養基配製方法
(1) 稱量：按培養基配方比例依次推確地稱取牛肉膏、蛋白腖、NaCL放人燒杯中。牛肉膏常用玻棒挑取，放在小燒杯或表麵皿中稱量，用熱水溶化後倒入燒杯，也可按在稱量紙上，稱量後直接放入水中，這時如稍微加熱，牛肉膏便會與稱量紙分離，然後立即取出紙片。
蛋白腖很易吸濕，在稱取時動作要迅速。另外，稱藥品時嚴防藥品混雜，一把牛角匙用於一種藥品，或稱取一種藥品後，洗淨，擦幹，再稱取另一藥品。瓶蓋也不要蓋錯。
(2) 溶化：在上述燒杯中先加入少於所需要的水量，用玻棒攪勻，然後，在石棉網上加熱使其溶解。
將藥品完全溶解後，補充水到所需的總體積，如果配製固體培養基時，將稱好的瓊脂放入己溶的藥品中，再加熱溶化，最後補足所損失的水分。
在瓊脂溶化過程中，應控製火力，以免培養基因沸騰而溢出容器。同時．需不斷攪拌．以防瓊脂糊底燒焦。配製培養基時，不可用銅或鐵鍋加熱溶化，以免離子進入培養基中，影晌細菌生長。
(3) 調 pH
在未調 pH前，先用精密 pH試紙測量培養基的原始 pH，如果偏酸，用滴管向培養基中逐滴加入 1mol/LNaOH,邊加邊攪拌，並隨時用 pH試紙測其 pH，直至 pH達 7.6。反之，用 mol/LHCL 進行調節。
對於有些要求 pH較精確的微生物，其 pH的調節可用酸度計進行。
pH 不要調過頭，以避免回調而影響培養基內各離子的濃度。配製 pH低的瓊脂培養基時，若預先調好 pH 並在高壓蒸氣下滅菌，則瓊脂因水解不能凝固。因此，應將培養基的成分和瓊脂分開滅菌後再混合，或在中性 pH條件下滅菌，再調整 PH。
(4) 過濾
趁熱用濾紙或多層紗布過濾， 以利某些實驗結果的觀察。 一般無特殊要求的情況下可以省去 （本實驗勿需過濾）。
(5) 分裝
按實驗要求，可將配製的培養基分裝人試管內或三角燒瓶內。
1) 液體分裝：分裝高度以試管高度的 l／4 左右為宜。分裝三角瓶的量則根據需要而定，一般以不超過三角瓶容積的一半為宜，如果是用於振蕩培養用，則根據通氣量的要求酌情減少；有的液體培養基在滅菌後，需要補加一定量的其他無菌成分，如抗生素等，則裝量一定要準確。
2) 固體分裝：分裝試管，其裝量不超過管高的 1/5，滅菌後製成斜麵。分裝三角燒瓶的量以不超過三角燒瓶容積的一半為宜。
3) 半固體分裝：試管一般以試管高度的 1/3為宜，滅菌後垂直待凝。
分裝過程中，注意不要使培養基沾在管(瓶)口上，以免沾汙棉塞而引起汙染。
(6) 加塞
培養基分裝完畢後，在試管口或三角烷瓶口上塞上棉塞（或泡沫塑料塞及試管帽等），棉塞的作用有二：一方麵阻止外界微生物進入培養基，防止由此而引起的汙染；另一方麵保證有良好的通氣性能，使培養在裏麵的微生物能夠從外界源源不斷地獲得新鮮無菌空氣。因此棉塞質量的好壞對
實驗的結果有著很大的影響。一隻好的棉塞，外形應象一隻蘑菇，大小、鬆緊都應適當。加塞時的棉塞的總長度的 3/5應在口內，2/5在口外。
(7) 包紮
加塞後，將全部試管用麻繩捆好，再在棉塞外包一層牛皮紙，以防止滅菌時冷凝水潤濕棉塞，其外再用一道麻繩紮好。用記號筆注明培養基名稱、組別、配製日期。三角燒瓶加塞後，外包牛皮紙，用麻繩以活結形式紮好，使用時容易解開，同樣用記號筆注明培養基名稱、組別、配製日期。
(8) 滅菌
將上述培養基以 0.103MPa，121℃，20min高壓蒸氣滅菌。
(9) 擱置斜麵
將滅菌的試管培養基冷至 50℃左右 〔以防斜麵上冷凝水太多〕，將試管口端捆在玻棒或其他合適高度的器具上，擱置的斜麵長度以不超過試管總長的一半為宜 。
10) 無菌撿查
將滅菌培養基放人 37℃的溫室中培養 24—48h，以檢查滅菌是否徹底。
2．高氏 I號培養基配製方法
(1) 稱量和溶化
按配方先稱取可溶性澱粉、放入小燒杯中，並用少量冷水將澱粉調成糊狀，再加入少於所需水量的沸水中，繼續加熱，使可溶性澱粉完全溶化。然後再稱取其他各成分依次逐一溶化。如要配製固體培養基，其溶化過程同牛肉膏蛋白腖培養基配製方法。
(2) pH調節、分裝、包紮、滅菌及無菌檢查同牛肉膏蛋白腖培養基配製方法。
3．馬鈴薯培養基配製方法
取去皮馬鈴薯 200g，切成小塊，放入 1500mL的燒杯中煮沸 30min，注意用玻棒攪拌以防糊底。
然後用雙層紗布過濾，取濾液加糖（酵母菌用葡萄糖，黴菌用蔗糖），加熱煮沸後加入瓊脂，繼續加熱融化並補足失水。再按前所述，進行分裝、加塞、包紮、0.1MPa滅菌 20 min。
4．察氏培養基配製方法
方法同牛肉膏蛋白腖培養基配製。
實驗結果及討論
針對實驗原理、步驟、現象進行討論。
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