1 範圍
本標準規定了醫藥工業潔淨室和潔淨區中沉降菌的測試條件、測試方法。
本標準適用於醫藥工業潔淨室和潔淨區，無菌室或無菌區域（包括潔淨工作台）的沉降菌的測定和環境的驗證。
2 引用標準
下列標準所包含的條文，通過在本標準中引用而構成為本標準的條文。本標準出版時，所示版本均為有效。所有標準都會被修訂，使用本標準的各方應探討使用下列標準最新版本的可能性。
YY/T0188.6—1995藥品檢驗操作規程 第6部分：藥品生物測定法
3 定義
本標準采用下列定義
3.1 潔淨室（區） clean room(area)
對塵粒及微生物汙染規定需進行環境控製的房間或區域。其建築結構、裝備及其使用均具有減少對該區域內汙染源的介入、產生和滯留的功能。
3.2 潔淨工作台 cleaning work station
一種工作台或者與之類似的一個封閉圍擋工作區其特點是自身能夠供給經過過濾的空氣或氣體，如垂直層流置、水平層流罩、垂直層流潔淨工作、水平層流潔淨工作台、自淨器等。
3.3 潔淨度 cleanliness
潔淨環境內單位體積空氣中含大於或等於某一粒徑的懸浮粒子的允許統計數。
3.4 菌落 colony forming unist
細菌培養後，由一個或幾個細菌繁殖而形成的一細菌集落，簡稱CFU。通常用個數表示。
3.5 沉降菌 settling microbe
用本標準提及的方法收集到的活微生物粒子，通過專用的培養基，在適宜的生長條件下繁殖到可見的菌落數。
3.6 懸浮粒子 ailborne Paritical
可懸浮在空氣中的尺寸一般在0.001μm～1 000μm之間的固體、液體或兩者的混合物質，包括生物性粒和非生物性粒子。
3.7 單向流unidirectional air flow（曾稱為層流laminar flow）
沿著平行流線，以單一通路以一定流速向單一方向流動的氣流。
3.8 非單向流nonunidirectional air flow（曾稱為亂流turbulent flow）
具有多個通路循環特性或氣流方向不平行的，不滿足單向流定義的氣流。
3.9 靜態測試 at—rest test
潔淨室（區）淨化空氣調節係統已處於正常運行狀態，工藝設備已安裝，潔淨室（區）內沒有生產人員的情況下進行的測試。
3.10 動態測試 operational test
潔淨室（區）已處於正常生產狀態下進行的測試。
4 測試方法
4.1 方法概述
本測試方法采用沉降法，即通過自然沉降原理收集在空氣中的生物粒子於培養基平皿，經若幹時間，在適宜的條件下讓其繁殖到可見的菌落進行計數，以平板培養皿中的菌落數來判定潔淨環境內的活微生物數，並以此來評定潔淨室（區）的潔淨度。
4.2 所用的儀器和設備
4.2.1 高壓消毒鍋
使用時應嚴格按照儀器說明書操作。
4.2.2 恒溫培養箱
必須定期對培養箱的溫度計進行檢定。
4.2.3 培養皿
一般采用Æ90mm×15mm的硼矽酸玻璃培養皿。
4.2.4 培養基
普通肉湯瓊脂培養基或其他藥典認可的培養基。其配製方法見附錄A（標準的附錄）。
4.3 測試步驟
4.3.1 采樣方法
將已製備好的培養皿按5.4.1.2的要求放置，打開培養皿蓋，使培養基表麵暴露0.5h，再將培養皿蓋蓋上後倒置。
4.3.2 培養
4.3.2.1 全部采樣結束後，將培養倒置於恒溫培養箱中培養。
4.3.2.2 在30℃～35℃培養箱中培養，時間不少於48h。
4.3.2.3 每批培養基應有對照試驗，檢驗培養基本身是否汙染。可每批選定3隻培養皿作對照培養。
4.3.3 菌落計數
4.3.3.1 用肉眼直接計數，標記或在菌落計數器上點計，然後用5～10倍放大鏡檢查，不否遺漏。
4.3.3.2 若培養皿上有2個或2個以上的菌落重疊，可分辨時仍以2 個或2個以上菌落計數。
4.4 注意事項
4.4.1 測試用具要作滅菌處理，以確保測試的可靠性、正確性。
4.4.2 采取一切措施防止人為對樣本的汙染。
4.4.3 對培養基、培養條件及其他參數作詳細的記錄。
4.4.4 由於細菌種類繁多，差別甚大，計數時一般用透射光於培養皿背麵或正麵仔細觀察，不要漏計培養皿邊緣生長的菌落，並須注意細菌菌落與培養基沉定物的區別，必要時用顯微鏡鑒別。
4.4.5 采樣前應仔細檢查每個培養皿的質量，如發現變質、破損或汙染的應剔除。
5 測試規則
5.1 測試狀態
5.1.1 沉降菌測試前，被測試潔淨室（區）的溫濕度須達到規定的要求，靜壓差、換氣次數、空氣流速必須控製在規定值內。
5.1.2 沉降菌測試前，被測試潔淨室（區）已經過消毒。
5.1.3 測試狀態有靜態和動態兩種，測試狀態的選擇必須符合生產的要求，並在報告中注明測試狀態。
5.2 測試人員
5.2.1 測試人員必須穿戴符合環境潔淨度級別的工作服。
5.2.2 靜態測試時，室內測試人員不得多於二人。
5.3 測試時間
5.3.1 對單向流，如100級淨化房間及層流工作台，測試應在淨化空調係統正常運行不少於10min後開始。
5.3.2 對非單向流，如10 000級、100 000級以上的淨化房間，測試應在淨化空調係統正常運行不少於30min後開始。
5.4 沉降菌計數
5.4.1 采樣點數目及其布置
5.4.1.1 最少采樣點數目
沉降法的最少采樣點數可按表1確定。
表1 最少采樣點數目
|
麵 積
m2 |
潔 淨 度 級 別 |
|
100 |
10 000 |
100 000 |
|
<10 |
2～3 |
2 |
2 |
|
≥～<20 |
4 |
2 |
2 |
|
≥～<40 |
8 |
2 |
2 |
|
≥40～<100 |
16 |
4 |
2 |
|
≥100～<200 |
40 |
10 |
3 |
|
≥200～<400 |
80 |
20 |
6 |
|
≥400～<1000 |
160 |
40 |
13 |
|
≥1 000～<2 000 |
400 |
100 |
32 |
|
2000 |
800 |
200 |
63 |
|
注：表中的麵積，對於單向流潔淨室，指的是送風麵麵積，對非單向流潔淨室是指的房間麵積。 |
在滿足最少測點數的同時，還宜滿足最少培養皿數，見表2。
表2 最少培養皿數
|
潔淨度級別 |
所需Æ90mm培養皿數（以沉降0.5h 計） |
|
100 |
14
2
2 |
|
10 000 |
|
100 000 |
5.4.1.2 采樣點的布置
采樣點的位置可以同懸浮粒子測試點。
a）工作區采樣點的位置離地0.8m～1.5m左右（略高於工作麵）。
b）可在關鍵設備或關鍵工作活動範圍處增加采樣點。
采樣點位置的詳細規則見附錄B（標準的附錄）。
5.5 記錄
測試報告中應記錄房間溫度、相對濕度、壓差及測試狀態。
測試報告的編寫見附錄C（標準的附錄）。
5.6 結果計算
5.6.1 用計數方法得出各個培養皿的菌落數。
5.6.2 平均菌落數的計算，見式（1）。
平均菌落數M= ……………（1）
式中：M——平均菌落數；
M1——1號培養皿菌落數；
M2——2號培養皿菌落數；
Mn——n號培養皿菌落數；
n——培養皿總數。
5.7 結果評定
用平均菌落數判斷潔淨室（區）空氣中的微生物。
5.7.1 潔淨室（區）內的平均菌落數必須低於所選定的評定標準。
5.7.2 若某潔淨室（區）內的平均菌落數超過評定標準，則必須對此區域先進行消毒，然後重新采樣兩次，測試結果均須合格。
上一篇：各國藥典細菌內毒素檢查法分析與比較
下一篇：關於完善食品微生物檢驗體係的建議
